详细介绍
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
详细参考数值:
产品名称:乳腺癌易感蛋白ELISA检测试剂盒
英文名称:Breast Cancer Susceptibility Protein
检测范围:31.25pg/mL~1000pg/mL
货号:YS-E98930
性状:盒状液体。
实验方法:竞争法、一步法、夹心法、高敏法等。
作用范围:科学研究。
样品形式:血清血浆细胞培养上清其它生物液体
保质期:6个月,本公司试剂盒系列产品均为**批次,请放心购买!
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引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作,必能得出准确的实验结果,可提供免费技术咨询服务!
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
优点:
1、*抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的优化方案----重复性高,可靠性强
4、购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5、技术服务要求:专业,规范,高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9、经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,科研队伍,良好的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴。
TNFRSF17 ProteinHuman重组人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 蛋白 (His & Fc 标签)
HA ProteinH7N9重组甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
黄杨碱 英文名称:Huang Yangjian 规格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
川芎 英文名称:Ligusticum chuanxiong Hort 规格:1g 保存:-20℃,避光
IL1R2 ProteinMouse重组小鼠 IL1R2 / CD121b 蛋白 (His 标签)
甲基原薯蓣皂苷 英文名称:Methyl protodioscin 规格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
营养琼脂(琼脂20g)250g用途:用于样品中菌落总数的计数。
IL1R1 ProteinCynomolgus重组食蟹猴 IL1R1 蛋白 (His 标签)
液体硫乙醇酸盐培养基(FT)250g用于产气荚膜梭菌确证试验的细菌培养
MERTK ProteinHuman重组人 MERTK / Mer 蛋白 GST 标签
IL1B ProteinCanine重组狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白
甘松 英文名称:Gan Song 规格:2.4g 保存:-20℃,避光
CDCP1 ProteinHuman重组人 CDCP1 / CD318 蛋白 (Fc 标签)
ICAM2 ProteinMouse重组小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白
乳腺癌易感蛋白ELISA检测试剂盒 Aurora Bβ淀粉样肽(1-28)抗体 glycolipid ELISA Kit 糖脂抗体 (glycolipid)ELISA试剂盒
Aggrecanase-2有丝分裂激酶B抗体 GP-MM ELISA Kit 糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒
ADAM10软骨蛋白聚糖抗体 GP-II ELISA Kit 糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒
ASB9去整合素样金属蛋白酶10抗体 GP-BB ELISA Kit 糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒
ASB8含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族9抗体 GP ELISA Kit 糖原磷酸化酶(GP)ELISA试剂盒
ABP1含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族8抗体 GSK-3 ELISA Kit 糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒
ACTR1A植物生长ABP1抗体 GSK ELISA Kit 糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒
AHSP肌动蛋白相关蛋白1抗体 CDT ELISA Kit 糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒
ATP1α红分化相关因子抗体 GR-β ELISA Kit 糖皮质受体β(GR-β)ELISA试剂盒
AFM血管紧张素蛋白1抗体 GR-α ELISA Kit 糖皮质受体α(GR-α)ELISA试剂盒
AFAP1L2Alpha清蛋白抗体 GPI ELISA Kit 糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA试剂盒
AHNAKAFAP1L2抗体 CA19-9 ELISA Kit 糖链抗原19-9(CA19-9)ELISA试剂盒
AJAP1神经分化相关蛋白AHNAK抗体 CA72-4 ELISA Kit 糖类抗原72-4(CA72-4)ELISA试剂盒
ADAM13粘合连接相关蛋白1抗体 CA50 ELISA Kit 糖类抗原50(CA50)ELISA试剂盒
Agrin去整合素样金属蛋白酶13抗体 CA19-9 ELISA Kit 糖类抗原19-9(CA19-9)ELISA试剂盒