大鼠色素上皮衍生因子（PEDF）酶联免疫试剂盒

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大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)酶联免疫试剂盒※包被抗原
1. 用50mM 的碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原浓度为10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶标板，4℃放置过夜。
2. 第二天弃去包被液后，用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。
3. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。
4. PBST 洗涤5 次后，加入100μl 稀释后的HRP 标记的二抗，37℃孵育1 小时。
5. PBST 洗涤5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。
※包被细胞
1. 在96 孔培养板上接种细胞数为1 x 104 cells/well，37℃过夜培养。
2. 第二天用PBS 洗涤培养板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀释）, 室温下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗涤培养板3 次，并晾干，储藏在2-8℃备用。
5. 用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。
6. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。，加入100 μl 稀释后的HRP 标记的二抗,37℃孵育1 小时。
8. PBST 洗涤
7. PBST 洗涤5 次后5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。50mM 的碳酸盐包被缓冲液：0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至100 ml。

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