详细介绍
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:
产品名称 | 英文名称 | 分类 |
猪链球菌型PCR检测试剂盒 | Streptococcus sui2PCR | PCR检测试剂盒 |
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
P53(wt-p53)英文名称:AGEs化热休克蛋白90α体
Mtp53(Mutant type p53)英文名称:AGEs control article(advanced glycosylation end products control article)化组蛋白H2AX体
WIG-1(wtp53-induced gene 1)英文名称:ET-1(Endothelin-1)化组蛋白H3体
P73 protein英文名称:GRGDS peptide化组蛋白H3体
p70 S6 Kinase/P70 Beta1英文名称:PACAP(1-38 Peptide)化组蛋白H3体
PALB2(partner and locaizer of BRCA2)英文名称:MBP(Myelin Basic Protein, MBP 68-86)组蛋白去酰化酶5体
PAFR/PTAFR英文名称:BursinA型流感病H5N1凝集
Phospho-PAK4 (Ser99) peptide英文名称:Leupeptin 人巨细胞病UL49蛋白体JWA英文名称:Histone H2B.s脱氧胞苷脱酶蛋白体
Junctophilin 3英文名称:HDAC4 + 5 + 9蛋白激酶锚定蛋白13体
JAMC英文名称:HSPBAP1AP-1μ2体
JAK1英文名称:HMBS肥大细胞膜抑制性受体Allergin1体
JMJD2A英文名称:HORMAD2钠通道蛋白1体
JMJD5英文名称:HRP2肌动蛋白相关蛋白2/3复合亚单位B1体
phospho-JUP(Tyr550)英文名称:HCA57三苷结合转运蛋白G超家族成员2体
JLP英文名称:Complement C3胎蛋白体
猪链球菌型PCR检测试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。