小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）酶联免疫试剂盒

小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)酶联免疫试剂盒ELISA的操作要点☟

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条
件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。
本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试
剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出
准确的结果。

小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)酶联免疫试剂盒⑴标本的采取和保存
可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物
（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假
阳性反应。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
⑵ 试剂的准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包
括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出
的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰
箱保存。
⑶加样
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物
加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
⑷保温
保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。
⑸洗涤
可分为浸泡式和流水冲洗式两种洗涤方式。
⑹显色和比色
▷显色是ELISA中的zui后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应
的温度和时间仍是影响显色的因素。
▷比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比
色架中。以软板为载体的试验，需先将板置于标准96孔的座架中，才可进行比色。
▷酶标比色仪
简称酶标仪，通常指于测读ELISA结果吸光度的光度计。针对固相载体形式的不同，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计。
⑺结果判断
①定性测定
a．间接法和夹心法
阳性判定值；标本/阴性对照比值。
b. 竞争法
阳性判定值法；抑制率法。
②定量测定

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