详细介绍
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
详细参考数值:
产品名称:铜蓝蛋白ELISA检测试剂盒
英文名称:Ceruloplasmin
检测范围:37.5μg/mL~1200μg/mL
货号:YS-E97384
性状:盒状液体。
实验方法:竞争法、一步法、夹心法、高敏法等。
作用范围:科学研究。
样品形式:血清血浆细胞培养上清其它生物液体
保质期:6个月,本公司试剂盒系列产品均为**批次,请放心购买!
库存信息: *√质量保证√库存充足√
引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作,必能得出准确的实验结果,可提供免费技术咨询服务!
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
优点:
1、*抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的优化方案----重复性高,可靠性强
4、购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5、技术服务要求:专业,规范,高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9、经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,科研队伍,良好的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴。
1mL Protein A磁珠
1瓶 G422细胞株 G422 低温运输和保存
2 ug pOJ260 pOJ260 低温运输,-20℃保存
100mL Ammonium Sulfate Solution, Saturated(饱和硫酸铵溶液) Ammonium Sulfate Solution, Saturated 常温保存
250mL Acetate Buffer(乙酸缓冲液),1M,pH3.0 Acetate Buffer,1M,pH3.0 常温保存
2 ug pGEX-6P-2 pGEX-6P-2 低温运输,-20℃保存
1瓶 NB-4细胞株 NB-4 低温运输和保存
2 ug pmCherry-LC3 pmCherry-LC3 低温运输,-20℃保存
10次 一站式RNA电泳套装 One-Stop RNA Electrophoresis Kit 4℃保存
200 mL 人中性粒细胞分离液1.085 Cell Separation Solution -20℃保存
2 ug pBLADE-SX pBLADE-SX 低温运输,-20℃保存
1瓶 MA-891细胞株 MA-891 低温运输和保存
1张 硝酸纤维素膜,13×20 cm(Tiandz) Nitrocellulose Membrane 常温
铜蓝蛋白ELISA检测试剂盒溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 用于压力蒸汽灭菌效果评价(GB15981-1995和GB15979-2002)。 250g
溴甲酚紫葡萄糖肉汤 用于低酸性罐头食品商业无菌检验 250g
溴甲酚紫葡萄糖肉汤 用于培养细菌和鉴别细菌发酵葡萄糖试验,还用于低酸性罐头食品商业无菌检验(GB/T4789.26-2003)。 250g
需氧、厌氧菌琼脂培养基(FT) 用于一般细菌培养、复壮、增菌等,也可用于消毒剂定性消毒效果测定。(WS) 250g
选择性胰蛋白胨大豆肉汤培养基配套试剂 每支多粘菌素1mg和萘啶酮酸1mg,添加于225mL胰蛋白胨大豆肉汤(024051)中配成选择性胰蛋白胨大豆肉... 10支/盒
血平板 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-2010,GB/T4789.37-2008 ,GB 4789.30-2... 90mm×20个
血平板 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验。(GB、ISO) 90mmX20个
血平板 (成品培养基) 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验 20个/盒
血琼脂培养基基础 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验 250g
血琼脂培养基基础 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 250g
蕈糖 细菌生化鉴定 20支/盒
芽孢染色液 用于细菌芽孢染色。 10mL×2瓶