人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维专用培养基

人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维专用培养基

人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞的培养。

产品主要成分：

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。

1）复苏人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基密度。

2）细胞传代：如果人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

1.使用人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基时应注意无菌操作，避免污染。

2.本产品含有血清和双抗，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可以直接使用。

3.为保持本人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基的优良使用效果，不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。

4.所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用。

5.本产品只供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。

6.培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响人原代脊柱炎髋关节滑膜成纤维细胞培养基正常使用。