水牛皮肤成纤维样细胞；WB-S5培养

细胞名称  水牛皮肤成纤维样细胞；WB-S5培养
形态特性 成纤维细胞样

品牌 贴壁生长

特征特性 该细胞系来源于一雌性河川型水牛与沼泽型水牛杂交后代的耳部皮肤组织，2010年由中科院昆明细胞库建立。

培养条件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

传代方法 1：

2传代；3-4天一次  

传代情况 P2

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　

支原体检测 荧光法（-）　

STR -

同工酶

染色体

使用权限 A类
水牛皮肤成纤维样细胞；WB-S5培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
Anti-phospho-Cyclin E(Thr62) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素E抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 荧光素标记磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1/2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Caspase-1(actived P10) 天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族抗体 规格 0.1ml

Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原 0.5ml

HCST 英文名称： 造血细胞信号转导蛋白抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh SIPA1 信号诱导增殖相关蛋白1抗体 规格 0.2ml

Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 荧光素标记磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1/2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
IRAK(Human interleukin receptor associated kinase) ELISA Kit 人白介素受体相关激酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NCX2/SLC8A2 钠钙交换蛋白2抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-31 白细胞介素31抗体 规格 0.2ml

MIP-3 Beta/ELC/CCL19 ELISA Kit 大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β 96T

PIG3 英文名称： p53诱导蛋白3抗体 0.2ml

CD66c 英文名称： 癌胚抗原相关细胞粘附分子抗体 0.1ml

Anti-NCX2/SLC8A2 钠钙交换蛋白2抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/PE PE标记的兔抗长爪沙鼠IgG 0.1ml

Guanylyl Cyclase alpha 2 英文名称： 鸟苷酸环化酶α2/GCS-α-2抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh AQP2 水通道蛋白-2抗体 规格 0.1ml

Anti-IL-3/FITC (mouse, rat) 荧光素标记白介素3抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的兔抗水貂IgG 规格 0.1ml

Anti-PPIG/FITC 荧光素标记亲环蛋白(亲环素)PPIG抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Anti-Phospho-Ret (Tyr905) /FITC 荧光素标记磷酸化指状蛋白RET抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-phosphor-LKB1(Ser428) /FITC 荧光素标记磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CASD1/C7orf12 第七号染色体开放阅读框12抗体 规格 0.2ml

ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1) 内皮素转化酶1抗原 0.5mg

Hepatitis C Virus genotype 1a NS5 英文名称： 丙型肝炎病毒1a基因型NS5蛋白抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh Sidekick 2 细胞粘附分子伴侣蛋白2抗体 规格 0.2ml

Anti-phosphor-LKB1(Ser428) /FITC 荧光素标记磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。