猪肾细胞；PK（15）培养

细胞名称  猪肾细胞；PK（15）培养
形态特性 上皮样

品牌 贴壁生长

特征特性 该细胞逆转录病毒阳性，对猪霍乱，猪疱疹，口蹄疫，牛痘等敏感。

培养条件 MEM-EBSS：

Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS  

传代方法 1:2-1:4，每周换液2-3次

传代情况 P134/136

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　

支原体检测 培养法（-）

STR

同工酶

染色体

使用权限 A类

猪肾细胞；PK（15）培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
Anti-Phospho-FoxO1 (Ser319) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠叉头蛋白家族1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-NKA/FITC 荧光素标记神经激肽A抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh BTG1 B细胞迁移基因1抗体 规格 0.2ml

AT1R/AGTR1(Angiotensin II Type 1 Receptor) 血管紧张素Ⅱ-1型受体抗原 0.5mg

HBV pre S1 protein 英文名称： 人pre S1/S2蛋白抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) 磷酸化RNA聚合酶II CTD抗体 规格 0.1ml

Anti-NKA/FITC 荧光素标记神经激肽A抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Klf4 (Kruppel likefactor 4) 肠道内富含的Kruppel样因子抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗体Multi-class antibodies规格： 1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Caspase-9 (Ser196) 磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗体 规格 0.1ml

BSA封闭液 10ml Gibco原料,2%血清

VP2 英文名称： 重组猪细小病毒VP2蛋白抗体 0.2ml

DNA Polymerase delta, catalytic subunit 英文名称： DNA聚合酶δ催化亚单位/DNA pol δ cat抗体 0.2ml

Anti-alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗体Multi-class antibodies规格： 1ml
Rabbit Anti-MK IgM/APC APC标记的兔抗猴IgM 0.1ml

GDIA1 英文名称： 转移抑制基因GDIA1抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh ANKRD13A 锚蛋白重复结构域蛋白13A抗体 规格 0.2ml

Anti-Phospho-IRAK1 (Ser376) /FITC 荧光素标记磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗人IgG F(ab')2 规格 0.1ml

Anti-SATB1/FITC 荧光素标记核基质结合区结合蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Anti-CYP3A4/FITC 荧光素标记抗细胞色素P450 3A4抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 荧光素标记整合素α4β7抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CAS/CSE1 细胞凋亡敏感性基因抗体 规格 0.1ml

E2 tag E2 tag多肽抗原 0.5mg

HENMT1 英文名称： HEN1甲基转移酶同源蛋白1抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh SIAH1 泛素连接酶Siah1抗体 规格 0.1ml

Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 荧光素标记整合素α4β7抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。