幼兔肺成纤维样细胞培养

细胞名称  幼兔肺成纤维样细胞培养
形态特性 成纤维样细胞

品牌 贴壁生长

特征特性 该细胞系来源于一出生三天的幼兔的正常肺组织。2014年由中科院昆明细胞库建立。

培养条件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

传代方法 1：

2传代；3-4天一次  

传代情况 P2

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS

支原体检测 荧光法（-）

STR -

同工酶 无

染色体

使用权限 A类
幼兔肺成纤维样细胞培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
Anti-FLAG Tag (CT)/HRP 辣根过氧化物酶标记 FLAG Tag标签抗体(C端)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 荧光素标记磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C9orf153 9号染色体开放阅读框153抗体 规格 0.2ml

CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依赖性激酶5抗原 0.5mg

HAPLN4 英文名称： 透明质酸及粘蛋白4抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh SDCCAG8 结肠癌抗原8抗体 规格 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 荧光素标记磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
LDH(Lactate Dehydrogenase) 乳酸脱氢酶抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Hepatocyte 人肝细胞单克隆抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Cas (Tyr165) 磷酸化细胞凋亡敏感性基因 规格 0.1ml

马血清封闭液 10ml Gibco原料,2%血清

V.cholera Ogawa 英文名称： 01群小川型霍乱弧菌抗体 0.2ml

phospho-DNA PKcs (Thr2638) 英文名称： 磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体 0.1ml

Anti-Hepatocyte 人肝细胞单克隆抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗猴IgG 0.1ml

GNG11 英文名称： G蛋白γ11/Gγ11 抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 血管生成素3/血管生成素4抗体 规格 0.1ml

Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 荧光素标记磷酸化胰岛素受体底物-1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-horse IgM/Gold 胶体金标记的兔抗马IgM 规格 0.5ml

Anti-Sema3A/FITC 荧光素标记臂板蛋白3A抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Anti-Phospho-DARPP32 (Thr75) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化多巴胺、cAMP调节磷蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-Lysozyme/FITC 荧光素标记溶菌酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CANX/Calnexin 钙连蛋白抗体 规格 0.1ml

DRD5 receptor(dopamine D5 receptor) 多巴胺受体-D5抗原 0.5mg

HERC3 英文名称： HERC3 E3泛素蛋白连接酶抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh SGLT1/GLT 1 钠-糖共转运载体1抗体 规格 0.1ml

Anti-Lysozyme/FITC 荧光素标记溶菌酶抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。