详细介绍
细胞名称 兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-1培养
形态特性 多角
品牌 贴壁生长
特征特性 利用2月龄大耳白兔胸腹主动脉,去除内皮,剥离外膜,进行原代培养,经aSMA鉴定纯度,连续培养可传代15次以上。
培养条件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:
3传代;3~4天1次。
传代情况 P9
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A
兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-1培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-GCN2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠蛋白激酶GCN2蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-NR2C/NMDAR2C /FITC 荧光素标记谷氨酸受体2C抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BNP/proBNP 脑纳素前体抗体 规格 0.1ml
HCV-Core 丙型肝炎病毒-C区(多肽) 1mg
HAND1 英文名称: 心脏和神经嵴衍生蛋白1抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh RELMa/RELM alpha 抵抗素样分子α抗体 规格 0.2ml
Anti-NR2C/NMDAR2C /FITC 荧光素标记谷氨酸受体2C抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
LEP ELISA kit 大鼠瘦素Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-A/H1N1-M2 Human/Gold 胶体金标记兔抗人A型流感病毒H1N1-M2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FBXL5 FBXL5蛋白抗体 规格 0.2ml
VCAM-1/CD106(Human Vascuolar cell adhesion molecule 1) ELISA kit 人血管内皮细胞粘附分子1 96T
MKLP2 英文名称: 有丝分裂驱动蛋白样2抗体 0.2ml
AADAC 英文名称: 芳香乙酰胺脱乙酰基酶抗体 0.1ml
Anti-A/H1N1-M2 Human/Gold 胶体金标记兔抗人A型流感病毒H1N1-M2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rabbit Anti-Monkey IgM/Bio 生物素标记的兔抗猴IgM 0.3ml
Glypican 6 英文名称: 磷脂酰基醇蛋白聚糖-6抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD20A3 锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体 规格 0.2ml
Anti-Integrin avb3/FITC 荧光素标记整合素avb3抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/APC APC标记的兔抗人IgG F(ab')2 规格 0.1ml
Anti-S6PDH/FITC 荧光素标记抗6-磷酸山梨醇脱氢酶抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-Bdkrb2/B2R/FITC 荧光素标记缓激肽B2受体抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-Glu-Glu Tag/FITC 荧光素标记兔抗Glu-Glu Tag标签抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CK7(human) 细胞角蛋白7抗体(人) 规格 0.2ml
DR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受体(抗原) 0.5mg
IHPK3 英文名称: 六磷酸肌醇激酶3抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh TRAILR1/DR4/APO2 死亡受体4抗体 规格 0.1ml
Anti-Glu-Glu Tag/FITC 荧光素标记兔抗Glu-Glu Tag标签抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。