详细介绍
细胞名称 犬胸腺细胞;cf2Th培养
形态特性
品牌 贴壁
特征特性 该细胞为几种逆转录病毒的敏感株,可用于扩增逆转录病毒。
培养条件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
传代方法 1:2-1:6,每周换液2-3次
传代情况
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
支原体检测 培养法(-)
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
犬胸腺细胞;cf2Th培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-CT/FITC 荧光素标记降钙素抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-Laminin Beta1/FITC 荧光素标记层粘连蛋白β1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CCDC114 卷曲螺旋结构域蛋白114抗体 规格 0.2ml
Gelsolin 凝溶胶蛋白抗原 0.5mg
HA tag(12CA5) 英文名称: HA tag标签单克隆抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh SLC7A9 离子转运相关蛋白SLC7A9抗体 规格 0.2ml
Anti-Laminin Beta1/FITC 荧光素标记层粘连蛋白β1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
LFA-3/CD58 ELISA Kit 大鼠淋巴细胞功能相关抗原3Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-AARS2 /FITC 荧光素标记丙氨酰tRNA合成酶2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FLT3L FMS样酪氨酸激酶3配体抗体 规格 0.2ml
ALT/GPT(Mouse Alanine Aminotransferase) ELISA Kit 小鼠丙酸转酶/谷丙转酶 96T
Motilin 英文名称: 胃动素抗体 0.1ml
AIF 英文名称: 调亡诱导因子抗体 0.1ml
Anti-AARS2 /FITC 荧光素标记丙氨酰tRNA合成酶2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/APC APC标记的兔抗小鼠IgG 0.1ml
phospho-GSK3 Beta (Tyr216) 英文名称: 磷酸化糖原合酶激酶3β抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANKS1B/AIDA1 β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体 规格 0.2ml
Anti-Inhibin BetaA/FITC 荧光素标记抑制素βA抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗人IgG 规格 0.1ml
Anti-ROS/FITC 荧光素标记活性氧簇ROS抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-IAA/FITC 荧光素标记吲哚-3-乙酸抗体/植物生长素单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶B(pSer473)抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASAM/ACAM 脂肪细胞特异性粘附分子抗体 规格 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的驴抗兔IgG 0.1ml
GIT2 英文名称: G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/Cy3 Cy3标记的兔抗猴IgM 规格 0.1ml
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶B(pSer473)抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。