详细介绍
细胞名称 杂交瘤细胞株;CD4-4D10培养
形态特性 淋巴母细胞样
品牌 悬浮生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:
3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
杂交瘤细胞株;CD4-4D10培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-Integrin Alpha3/FITC 荧光素标记整合素α3抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-S100-A8/MRP8/CFAG/FITC 荧光素标记钙结合蛋白S100A8抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD33B 锚蛋白重复结构域蛋白33B抗体 规格 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠IgG 0.3ml
GPD2 英文名称: 线粒体甘油三磷酸脱氢酶2抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/FITC FITC标记的兔抗人IgG F(ab')2 规格 0.1ml
Anti-S100-A8/MRP8/CFAG/FITC 荧光素标记钙结合蛋白S100A8抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
MIP-3 Alpha/CCL20 ELISA Kit 大鼠巨噬细胞炎性蛋白3αMulti-class antibodies规格: 48T
Anti-Bad/FITC 荧光素标记相关死亡促进因子Bad抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ETS2 癌基因ETS2抗体 规格 0.2ml
8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit 兔8-异构前列腺素 96T
Phospho-MYPT1 (Thr853) 英文名称: 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体 0.1ml
Annexin V 英文名称: 膜粘连蛋白5抗体 0.1ml
Anti-Bad/FITC 荧光素标记相关死亡促进因子Bad抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
rHIL-1Ra/PE 荧光素PE标记重组人白介素-1受体拮抗剂 0.1ml
Lingo-1 英文名称: Nogo受体反应蛋白抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh DCBLD2 内皮细胞和平滑肌细胞衍生的神经纤毛蛋白抗体 规格 0.2ml
5-HT (Rabbit 5-Hydroxytryptamine) ELISA Kit 兔子5羟色胺Multi-class antibodies规格: 96T
Rhesus antibody Rh γ-Catenin γ-连环素/连接蛋白γ抗体 规格 0.2ml
Anti-CXCL13/BLC-1/FITC 荧光素标记B-淋巴细胞趋化因子抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
u-T4 ELISA Kit 大鼠高敏甲状腺素Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-ULBP3/N2DL3 UL16结合蛋白3抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GCET1 B淋巴细胞生发中心相关蛋白抗体 规格 0.2ml
CXCL16 ELISA Kit 大鼠CXC趋化因子配体16 96T
phospho-NFATc2(Ser330) 英文名称: 磷酸化核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体 0.1ml
ADCY10 英文名称: 腺苷酸环化酶10抗体 0.2ml
Anti-ULBP3/N2DL3 UL16结合蛋白3抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。