详细介绍
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞;HPRT培养
形态特性 淋巴母细胞样
品牌 半贴壁生长
特征特性 细胞注射小鼠腹腔可产生高滴度的单抗,可用于基础研究和临床检验。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:
3传代,2-3天传一代
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶 同工酶鉴定
染色体
使用权限 A类
小鼠杂交瘤细胞;HPRT培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-HSP-27/HRP 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白27抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgG/Gold 金标记鼠抗羊IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies规格: 2ml
肠道病毒71型/手足口病病毒抗体 Anti-EV71 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗羊IgM 0.1ml
FUT5 英文名称: FUT5抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr184/187) 磷酸化转化生长因子β活化激酶1 规格 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgG/Gold 金标记鼠抗羊IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies规格: 2ml
PF(Human Pemphigus Foliaceus) ELISA Kit 人落叶型天疱疮抗体Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Integrin beta 7 整合素β7抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh LIPG/Endothelial lipase 内皮脂肪酶抗体 规格 0.2ml
HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit 人状瘤病毒抗体IgG 96T
REEP1 英文名称: 受体辅助蛋白1抗体 0.2ml
CLNS1A 英文名称: 氯离子通道调节蛋白1A抗体 0.2ml
Anti-Integrin beta 7 整合素β7抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
SPTLC2 英文名称: 丝酸棕榈酰转移酶2抗体 0.2ml
Phospho-EGFR(Tyr845) 英文名称: 磷酸化表皮生长因子受体抗体 0.1ml
转移生长因子–α抗体 Anti-TGF-α 0.1ml
Anti-TLR4/FITC 荧光素标记Toll样受体4抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶抗体 规格 0.1ml
BCHE(butyrylcholinesterase)CT 丁酰胆碱脂酶抗原(C端)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
AMA(Mouse Anti-myocardial antibody) ELISA Kit 小鼠抗心肌抗体Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-CD83/Cell surface protein HB15/FITC 荧光素标记CD83抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Doublecortin 双皮质素抗体 规格 0.1ml
CA50 上皮类癌相关抗原 96T
MGLUR2 + MGLUR3 英文名称: 促代谢型谷酸受体2+3抗体 0.2ml
ADCK2 英文名称: ADCK2蛋白抗体 0.2ml
Anti-CD83/Cell surface protein HB15/FITC 荧光素标记CD83抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。