EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMYM培养

细胞名称  EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMYM培养
形态特性 淋巴母细胞样

品牌 悬浮生长

特征特性 该细胞系来源于一成年女性的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。

培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS

传代方法 1：

2传代；5-6天一次  

传代情况 P2

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　

支原体检测 荧光法（-）　

STR -

同工酶

染色体

使用权限 A类

EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMYM培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
Anti-CD8/PE 荧光素藻红蛋白标记兔抗人、大、小鼠CD8抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

EGF(Epidermal growth factor)rat 重组表皮生长因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Artemin抗体 Anti-ART 0.1ml

ZBTB25 英文名称： 锌指蛋白46抗体 0.2ml

DAP1 英文名称： 死亡相关蛋白1抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体 规格 0.1ml

EGF(Epidermal growth factor)rat 重组表皮生长因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies规格： 0.5mg
USF-1(upstream stimulatory factor 1) 上游刺激因子1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCNA-Proliferation Marker 增殖细胞核抗原抗体 规格 0.1ml

DKK3 Kit Human 人 DKK3 / Dkk-3 / REIC ELISA配对抗体 ELISA

TMEM2L 英文名称： 跨膜蛋白2样蛋白抗体 0.2ml

CEBP Beta 英文名称： 转录调节因子C/EBP β抗体 0.1ml

Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
人多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP-1)ELISA试剂盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠α肌动蛋白(α Actin)ELISA试剂盒，英文名：α Actin ELISA Kit人的儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)ELISA试剂盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠骨特性碱性磷酸酶(BALP)ELISA试剂盒，英文名：BALP ELISA KiISA Kit for Human T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain小鼠雌激素(E)ELISA试剂盒，英文名：E ELISA Kit人胸腺表达趋化因子(TECK/CCL25)ELISA试剂盒人96T78-5000 pg/mL小鼠γ-氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒，英文名：GABA ELISA KiISA Kit for Human Monocyte differentiation antigen CD14小鼠cAMP反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒，英文名：CREB ELISA Kit人巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒，英文名：IL-6 ELISA KiISA Kit for Human Protein deltex-1小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA试剂盒，英文名：MUC5B ELISA Kit

人含蛋白2激进的S-腺苷甲硫氨酸域(RSAD2)ELISA试剂盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠白细胞介素10(IL-10)ELISA试剂盒，英文名：IL-10 ELISA KiISA Kit for Human Endoglin小鼠微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)ELISA试剂盒，英文名：MGST1 ELISA KiISA Kit for Human Heparin-binding growth factor 2小鼠巯基丙酮酸硫转移酶(MPST)ELISA试剂盒，英文名：MPST ELISA KiISA Kit for Human Gastrin小鼠激肽释放酶4(KLK4)ELISA试剂盒，英文名：KLK4 ELISA KiISA Kit for Human 10 kDa heat shock protein, mitochondrial小鼠防御素β2(DEFβ2)ELISA试剂盒，英文名：DEFβ2 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-22小鼠白介素27(IL27)ELISA试剂盒，英文名：IL27 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-15小鼠CD40配体(CD40L)ELISA试剂盒，英文名：CD40L ELISA Kit
山羊抗大鼠 IgG(H+L)/Biotin 0.1ml 美国Jackson公司分装

VAT1 英文名称： 嗜铬颗粒胺转运蛋白VAT1抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相关激酶抗体 规格 0.1ml

Neurocan 神经粘蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

DAP12 英文名称： 自然杀伤激活受体相关蛋白DAP12抗体 0.1ml

Anti-ATH III 凝血酶Ⅲ抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml
VEGF-C ELISA Kit 大鼠血管内皮细胞生长因子CMulti-class antibodies规格： 48T

Anti- Gamma-Adaptin/FITC 荧光素标记衔接蛋白γ抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAM82A1/RMD2 微管动力调节蛋白2抗体 规格 0.2ml

8-OHdG(Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine) ELISA Kit 小鼠8羟基脱氧鸟苷 96T

Myocardin 英文名称： 促血管平滑肌细胞分化因子抗体 0.2ml

Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198) 英文名称： 磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体 0.1ml

Anti- Gamma-Adaptin/FITC 荧光素标记衔接蛋白γ抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。