人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2培养

细胞名称  人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2培养
形态特性 上皮细胞样

品牌 贴壁生长　

特征特性 该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，zui后将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

培养条件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

传代方法 1：

3传代,2-3天传一代  

传代情况 C5

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　

支原体检测 阴性　

STR

同工酶 同工酶鉴定

染色体

使用权限 A类
人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK) 原活化蛋白激酶3抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

缓激肽B2受体抗体 Anti-Bdkrb2/B2R 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1092) 磷酸化表皮生长因子受体抗体 规格 0.1ml

N2添加剂 (原装) 5ml Gibco

ANKZF1 英文名称： 锌指蛋白744抗体 0.2ml

DVL1 英文名称： 蓬乱蛋白1抗体 0.1ml

缓激肽B2受体抗体 Anti-Bdkrb2/B2R 0.1ml
visfatin ELISA Kit 大鼠内脂素/内脏脂肪素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TRBF1/TRF1 端粒体复制结合因子1抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活内向钾通道3抗体 规格 0.1ml

NP-Y(Human neuropeptide Y) ELISA Kit 人神经肽Y 96T

NRARP 英文名称： NOTCH调节锚蛋白抗体 0.2ml

ARIP2a 英文名称： 激活素受体2A抗体 0.2ml

Anti-TRBF1/TRF1 端粒体复制结合因子1抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml
人外异蛋白A(Ectodysplasin-A)ELISA试剂盒人96T78-5000 pg/mL小鼠夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒，英文名：CLC ELISA Kit人线粒体CDP-甘油二酯-甘油-3-磷酸3磷酯酰转移酶(PGP synthase 1)ELISA试剂盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠肺肿瘤抑制因子1(TSLC1)ELISA试剂盒，英文名：TSLC1 ELISA KiISA Kit for Human Hepcidin prohormone大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒，英文名：M2-PK ELISA Kit人蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒，英文名：a-Glu ELISA Kit人G蛋白信号调节因子19(RGS19)ELISA试剂盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠白细胞介素18(IL-18)ELISA试剂盒，英文名：IL-18 ELISA Kit人S100-A10蛋白(Protein S100-A10)ELISA试剂盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠心钠肽(ANP)ELISA试剂盒，英文名：ANP ELISA Kit人突触极蛋白(Synaptopodin)ELISA试剂盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒，英文名：ATP ELISA Kit

人纤维蛋白原α链(FGA)ELISA试剂盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒，英文名：LPO ELISA Kit人转化生长因子β受体2(TGFR-2)ELISA试剂盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠棘皮动物微管关联蛋白样蛋白2(EML2)ELISA试剂盒，英文名：EML2 ELISA Kit人血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠二酰甘油-O-酰基转移酶同源物1(DGAT1)ELISA试剂盒，英文名：DGAT1 ELISA Kit人原基因Wnt-1 ELISA试剂盒人96T12.5-800 pg/mL大鼠白介素17(IL17)ELISA试剂盒，英文名：IL17 ELISA Kit豚鼠孕激素(progestogen)ELISA试剂盒，英文名：progestogen ELISA Kit人激酶A锚定蛋白17A(AKAP-17A)ELISA试剂盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA试剂盒，英文名：HBeAg ELISA Kit人腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase)ELISA试剂盒人96T3.12-200 U/L小鼠糖皮质激素受体α(GR-α)ELISA试剂盒，英文名：GR-α ELISA Kit
豚鼠IgG干粉 10mg/50mg 国产

WBSCR14 英文名称： 糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CDKN1A/P21 (Thr145) 磷酸化p21蛋白抗体 规格 0.1ml

IL-15(Interleukin-15) 白细胞介素-15抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Desmoglein 2 英文名称： 桥粒芯糖蛋白2抗体 0.1ml

Anti-Phospho-Ack1(Tyr857/858) 磷酸化Ack1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
Anti-WIP1/FITC 荧光素标记原癌基因WIP1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型胶原(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

抗ABC膜转运蛋白抗体 Anti-ABCG4 0.1ml

2 Cys Peroxiredoxin 英文名称： 硫氧还蛋白还原酶抗体 0.1ml

EFTUD2 英文名称： 延伸因子结合蛋白EFTUD2抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FLT3 (Tyr589/591) 磷酸化FMS样酪氨酸激酶3 规格 0.1ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型胶原(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。