人胚肺成纤维细胞；HFL1培养

细胞名称  人胚肺成纤维细胞；HFL1培养
形态特性 成纤维细胞样

品牌 贴壁生长

特征特性 该细胞为稳定二倍体细胞。

培养条件 F12K 10%FBS

传代方法 1:4-1:6，每周换液2-3次

传代情况 P16

冻存条件 90%FBS+10%DMSO

支原体检测

STR Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:8；D16S539:9,11；D18S51:15；D21S11:31.2,32.2；D3S1358:15,17；D5S818:11,12；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:21,24；PentaD:9,14；PentaE:21；TH01:6,9；TPOX:8；vWA:16

同工酶

染色体

使用权限 A类

人胚肺成纤维细胞；HFL1培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。

操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线

猪胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒phospho-APG4B(Ser309)

猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒AFAP

猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒ADORA1

猪胰岛素(INS)免疫试剂盒ARSB

猪一氧化氮(NO)免疫试剂盒A2BP1

猪氧还原蛋白过氧化物酶2(PRDX2)免疫试剂盒ADAM17

猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫试剂盒ARNT2 

猪血小板衍生生长因子(PDGF)免疫试剂盒ABH8

猪血小板活化因子(PAF)免疫试剂盒ABI3BP

猪血纤蛋白原降解产物(FDP)免疫试剂盒ARHGAP20

猪血栓素A2(TXA2)免疫试剂盒ASB10

猪血栓调节蛋白(TM)免疫试剂盒ALDH1L1

猪血清淀粉样蛋白A(SAA)免疫试剂盒Axin 2

猪血红蛋白(Hb)免疫试剂盒AMH

猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)免疫试剂盒EphA8

猪血管舒缓激肽(BK)免疫试剂盒Acetoacetyl-CoA synthetase

猪血管生成素2(ANG-2)免疫试剂盒ARNTL2

猪血管生成素1(ANG-1)免疫试剂盒phospho-AANAT (Thr29)