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详细介绍
PCR实验方法步骤：
方法
1
：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix
（2mM）
4 μl
引物1（10pM）
2 μl
引物2（10pM）
2 μl Taq
酶 （2U/μl）
1 μl DNA
模板（50ng-1μg/μl）
1 μl
加ddH2O至 50 μl
产品属性：
产品名称：嗜衣原体通用PCR检测试剂盒
英文名称：Chlamydophila spp. PCR
规格：50T
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
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实验过程：
一、试剂准备 | 二、操作步骤 |
1. DNA模板 2 ．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）3 ．10×PCR Buffer4 ．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5 ．Taq酶 | 1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl Taq 酶（2U/μl） 1μlDNA 模板（50ng-1μg/μl） 1 μl |
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3
．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4
．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1.
血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.
血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3.
细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4.
组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5.
保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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