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详细介绍
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3.在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
爱德华氏菌通用PCR检测试剂盒 | Edwardsiella spp.PCR | 50T |
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3.细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
定量PCR方法：
荧光定量PCR探针法 | 荧光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探针法即除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光集团和淬灭集团，这个时候，两个平衡不发光，但是当DNA通过引物合成的时候，探针被折断，释放出发光集团和淬灭集团，两个距离较远，发光集团产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量 | 染料能够与双链结合，当PCR扩增的时候，染料结合到DNA上，从而发光，单个的染料不发光，这样就能收集到信号，我们可以看出，染料法特异性不强，只要是双链的DNA都回结合发光。 | 在快速PCR中，通过缩减PCR步骤所需时间来完成更快的扩增，且不会影响扩增产量和效率。快速循环条件尤其适用于具有高扩增能力的DNA聚合酶，这类聚合酶在每个结合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸时间仅占低合成能力Taq聚合酶所需时间的1/2至1/3，却能维持较高的扩增效率。此外，如果引物的退火和延伸温度相差无几，则可将它们合并为一步，以进一步缩短PCR时间。这一过程也被称为 两步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物，某些遗传病及癌基因的分型鉴定。多种病原微生物的同时检测或鉴定，是在同一PCR反应管中同时加上多种病原微生物的特异性引物，进行PCR扩增.可用于同时检测多种病原体或鉴定出是那一型病原体感染。 |
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PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度
IgM/PE-CY5 PE-CY5
标记的兔抗羊IgM 0.1ml
FMDV Polyprotein (3A protein)： 口蹄疫病毒A型抗体 0.2ml
雌激素受体α/β抗体 Anti-ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 0.1ml
Anti-Peptide YY/PYY/FITC 荧光素标记酪酪肽抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser235) 0酸化微管相关蛋白抗体 规格 0.1ml
Goat Anti-human IgM/Gold 金标记羊抗人IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies规格： 0.5ml
小鼠血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG ELISA Kit
兔子内皮素1(ET-1)ELISA检测试剂盒rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit 96T/48T
犬β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫试剂盒 Dog β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit
英文名称HumanghrelinELISAKit人生长激素释放多肽(ghrelin)ELISA试剂盒规格：96T/48T
单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒10次
Ratlymphotactin,Lptn/LTNELISA试剂盒大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
爱德华氏菌通用PCR检测试剂盒IL-17(Interleukin-17)human 白介素-17抗原(人)Multi-class antibodies规格： 0.5mg
Anti-ACTH (18-39) 促肾上腺皮质激素ACTH(18-39)抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CDK9 (Thr186) 0酸化周期素依赖性9抗体 规格 0.1ml
马IgG干粉 10mg/50mg/100mg 国产
WDR91 英文名称： WDR91蛋白抗体 0.1ml
DIP13B 英文名称： DIP13β抗体 0.1ml
Anti-ACTH (18-39) 促肾上腺皮质激素ACTH(18-39)抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
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