磷脂酶D(PLD)重组蛋白

磷脂酶D(PLD)重组蛋白的相关产品：过氧化还原酶1(PRDX1)重组蛋白 物种； Mus musculus (Mouse，小鼠) 来源； 原核表达 性状：冻干粉 芳香胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)重组蛋白 物种； Mus musculus (Mouse，小鼠) 来源； 原核表达 性状：冻干粉 内质网氨肽酶2(ERAP2)重组蛋白 物种； Homo sapiens (Human，人) 来源；

标签选择：

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：

真核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表达载体的构建

c.      无内毒素的质粒抽提

d.      细胞瞬时转染

e.      表达小试，条件优化

f.       表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表达

h.      亲和纯化

i.        检测和鉴定

仅供科研实验产品属性：

英文名称：Recombinant Phospholipase D (PLD)

PLD1; Choline Phosphatase 1; Phosphatidylcholine-hydrolyzing phospholipase D1

信号转导 酶与激酶 代谢通路 营养代谢

物种：Homo sapiens (Human，人)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：细胞膜, 细胞质, 高尔基体, 内质网腔

预测分子量：43.4kDa

实际分子量：43kDa(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Thr725~Thr1074 with N-terminal His Tag

缓冲液成份：20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性状：冻干粉

纯度：> 90%

等电点：5.7

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

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原核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体

b.      密码子优化

c.      基因合成/亚克隆

d.      转化表达菌株

e.      蛋白表达小试分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化

g.      如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.      鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定

GZMH蛋白；表达蛋白的分析、纯化、检测

　　诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。

操作步骤 ：

根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品： 切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

唾液链球菌PCR检测试剂盒 英文名称; Streptococcus salivarius PCR 50T

弯曲杆菌PCR检测试剂盒 英文名称; Campylobacter spp.PCR 50T

伪旋毛虫PCR检测试剂盒 英文名称; Trichinella pseudospiralisPCR 50T

文氏巴尔通体PCR检测试剂盒 英文名称; Bartonella vinsoniiPCR 50T

PAX8(Paired box gene 8) 配对盒基因8抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Phospho-ULK1 (Ser467) 0酸化自噬相关蛋白1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-APBB1 (Ser175) 0酸化铁蛋白Fe65抗体 规格 0.1ml

PSAP 浓缩液 0.1ml 进口分装

Ube2H 英文名称： 泛素激活酶2H抗体 0.2ml

DCAKD 英文名称： 脱0酸结构域蛋白抗体 0.2ml

Anti-Phospho-ULK1 (Ser467) 0酸化自噬相关蛋白1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

磷脂酶D(PLD)重组蛋白丝状支原体簇PCR检测试剂盒 英文名称; Mycoplasma mycoides clusterPCR

丝状网尾线虫PCR检测试剂盒 英文名称; Dictyocaulus filariaPCR

硕大利什曼原虫PCR检测试剂盒 英文名称; Leishmania majorPCR

睡眠嗜组织菌PCR检测试剂盒 英文名称; Histophilus somniPCR

注意事项：  

1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。

3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。

4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作