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仅供科研实验产品属性:
产品名称 | 物种 | 性状 | 来源 |
脂肪酶H(LIPH)重组蛋白 | Homo sapiens (Human,人) | 冻干粉 | 原核表达 |
英文名称:Recombinant Lipase H (LIPH)
LPDLR; MPAPLA1; PLA1B; mPA-PLA1; LPD lipase-related protein; Phospholipase A1 member B; Membrane-associated phosphatidic acid-selective phospholipase A1-alpha
酶与激酶
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位::n/a
预测分子量:-
实际分子量:-(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:N-terminal His Tag
缓冲液成份:磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:-
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

标签选择:
亲和标签:蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用:一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易;另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类:一类是短肽类标签;一类是长肽以融合蛋白(fused partner)形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。
不同的系统步骤稍微有些不同的,大致步骤如下:
真核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体和宿主细胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表达载体的构建
c. 无内毒素的质粒抽提
d. 细胞瞬时转染
e. 表达小试,条件优化
f. 表达分析和鉴定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表达
h. 亲和纯化
i. 检测和鉴定
原核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体
b. 密码子优化
c. 基因合成/亚克隆
d. 转化表达菌株
e. 蛋白表达小试分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白亲和纯化
g. 如果蛋白不可溶,则需要变复性来制备可溶蛋白。
h. 鉴定,包括SDS-PAGE和WB鉴定
GZMH蛋白;表达蛋白的分析、纯化、检测
诱导表达成功后,表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当,按一般的实验步骤做没太大的问题。
操作步骤 :
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作