DOP-PCR试剂盒

DOP-PCR试剂盒产品及特点 本产品利用 Pfu DNA polymerase 所具有 3’到 5’的聚合酶活性和5’到 3’外切酶活性，将 3’和/或 5’突出的 DNA 段转化成平末端, 用于克隆工作。

1. 简单，精心优化过的 2 X Polishing Buffer 中含有所需要的所有成
分，不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的 DNA 载体。
规格及成分 成 份 编 号 20 次包装
2 X Polishing Buffer 60107A 0.5 mL
Pfu DNA Polymerase（3U/uL） 60107B 20 ul
使用手册 60107sc 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。
自备试剂 DNA 段
DOP-PCR试剂盒使用方法 1. DNA 段的准备：
无论是来源 Taq, Tth, T7, Klenow 和 Vent 等 DNA 聚合酶合成的 DNA
片段，还是用限制性内切酶制备的 DNA 段，粘转平之前均需要将 DNA 沉
淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀 DNA 的方法包括经典的盐/纯沉淀法，
离心柱 DNA 吸附法和天泽基因的一管式非醇超快 DNA 沉淀法。
2. 设置粘转平（Polishing）反应：
在一个干净的离心管中，分别加入
10-500 ng 3’或 5’突出的 DNA 段
25 uL 2 X Polishing Buffer
1 uL Pfu DNA polymerase
补水到 50 uL
72℃保温 2 小时。
DNA粘转平试剂盒注意：如果不使用热盖式 PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量
液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3. 反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于 T4 DNA 连
接酶催化的连接反应。对 10 uL 的连接反应体系，一般需要加入 1-2 uL 粘
转平反应液。由于 Pfu DNA polymerase 在连接反应的温度条件下几乎没有
活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。
相关资料
常见 DNA 聚合酶的粘转平效率
聚合酶 5’突出的碱基种类
A C G T 平均（%）
Taq 4 10 1 75 22.5
Klenow 12 3 20 67 25.5
T4 89 86 96 91 90.5
Pfu 93 89 93 89 91
 ----NAR 22:2423, 1994
关联产品 dA-Tailing Kit、dT-Tailing Kit