骨髓细胞单细胞悬液的制备

实验材料骨髓液

试剂、试剂盒肝素抗凝剂PBS

实验步骤

1. 无菌抽取骨髓液 0.5 ml。

2. 将骨髓标本滴入含 1000 U/ml 肝素抗凝剂的 1 ml PBS 液中。

3. 再加入 PBS 液稀释至 10 mI。

4. 用吸管吸取 5 ml 稀释骨髓液徐徐加入盛有 4 ml 的人类淋巴细胞分离液液面之上。

5. 在以上条件下，骨髓有核细胞分层在 PBS 人类淋巴细胞分离液之间形成的界面上。

6. 吸取有核细胞层，加入到 10 ml PBS 液中，混匀。

7. 以 1000 r/min 离心 5 min，弃上清；收集骨髓细胞，加固定液或置低温冰箱备用。

收起 

注意事项

1. 抽骨髓液时，先将注射器针头、针筒、针栓用肝素浸润，抽取时力量适中。

2. 在吸取淋巴细胞层时尽量少吸分离液，吸取量应掌握在 300 μl 左右，这样有利于洗去多余的分离液。

3. 溶红细胞的方法：以等量的蒸馏水加入到沉淀中，轻轻摇动片刻，见粉红色出现，立即加入大量生理盐水，混匀，离心，去除上清即可。

1600SiHa人子宫颈鳞癌细胞DMEM+10% FBS

1500CaSki人宫颈癌肠转移细胞/人宫颈癌上皮细胞DMEM+10% FBS

1500MDA-MB-231人乳腺癌细胞DMEM+10% FBS

1500SPC-A-1人肺癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1500Eca-109人食管癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1600THP-1人髓系白血病单核细胞RPMI-1640+10% FBS

1600K562人慢性骨髓性白血病细胞RPMI-1640+10% FBS

1500PC-3人前列腺癌细胞F-12K+10% FBS/DMEM +10% FBS

1500A549人非小细胞肺癌细胞F-12K+10% FBS

1800NCM460人正常结肠上皮细胞RPMI-1640+10% FBS

1500HCT-15人结肠癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1600COLO 320DM人结直肠腺癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1500COLO 320人结肠癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1600COLO 201人结直肠腺癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1600Caco-2人结直肠腺癌细胞DMEM+20% FBS

1800BEAS-2B人支气管上皮细胞DMEM+10% FBS

1600Raji人Burkitt's淋巴瘤细胞RPMI-1640+10% FBS

1600Daudi人Burkitt's淋巴瘤细胞RPMI-1640+10% FBS

1600RAMOS人B淋巴细胞瘤细胞RPMI-1640+10% FBS

1800T84人结肠腺癌肺转移细胞DMEM/F12+10% FBS

1800c666-1人鼻咽癌细胞RPMI-1640+10% FBS

2000HepG2.2.15表达HBV病毒的人肝癌细胞MEM+10% FBS+0.4mg/ml G418

1600T47D人乳腺导管癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1600SK-BR-3人乳腺癌细胞DMEM（高糖）+10% FBS

1500HT-29人结肠癌细胞McCoy’s +10% FBS

1500PLC/PRF/5人肝癌亚力山大细胞DMEM+10% FBS

1500L-02（HL-7702)人正常肝细胞DMEM+10% FBS

1500SGC-7901人胃癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1500786-O人肾透明细胞癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1500ACHN人肾癌细胞DMEM+10% FBS

1500SK-OV-3人卵巢癌细胞McCoy’s +10% FBS

1500769-P人肾细胞腺癌细胞RPMI-1640 + 10% FBS

1500NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞RPMI-1640+10% FBS

1500MKN-28（MKN-74)人胃癌高转移细胞RPMI-1640+10% FBS