上皮细胞可来源于外，内、中三个胚层；但培养中只有源于外和内胚层的细胞能反映出上皮细胞的特征细胞呈膜状生长的特点。而间皮和内皮刚接种培养和细胞量少时常呈成纤维细胞型，只有细胞数量较多时，才能显出膜状特点。内容来源：组织培养和分子细胞学技术
实验方法原理    利于皮肤表皮细胞培养成功的因素有，在有胶原的底物上易生长；另有人发现把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）上时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低pH、Ca2+的含量和温度等，均利于表皮细胞生长。向培养基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍乱毒素、10M-6 的异丙基肾上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生长因子（EGF）能促表皮细胞生长。
实验材料    皮肤血清
试剂、试剂盒    EDTA胰蛋白酶Eagle
仪器、耗材    血管钳吸管CO2温箱
实验步骤    
皮肤是皮表细胞培养来源，小儿包皮是皮肤表皮细胞培养的好材料。全皮培养时，表皮细胞与成纤维细胞混合生长，难以纯化。黑木登志夫（1981）用皮肤表皮和分离培养法可获纯上皮细胞，有一定参考价值，其法如下：
 
1.  取材

取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成 0.5~1 平方厘米小块；

2.  EDTA处理

先置入0.02 %EDTA 中室温置5 分钟；

3.  冷消化

换入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃过夜；

4.  分离

取出皮块，用血管钳或镊子把表皮与层分开；

5.  温消化

取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分钟；

6.  用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液；

7.  培养液

通过80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中，CO2温箱培养。

上皮细胞可来源于外，内、中三个胚层；但培养中只有源于外和内胚层的细胞能反映出上皮细胞的特征细胞呈膜状生长的特点。而间皮和内皮刚接种培养和细胞量少时常呈成纤维细胞型，只有细胞数量较多时，才能显出膜状特点。内容来源：组织培养和分子细胞学技术
实验方法原理    利于皮肤表皮细胞培养成功的因素有，在有胶原的底物上易生长；另有人发现把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）上时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低pH、Ca2+的含量和温度等，均利于表皮细胞生长。向培养基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍乱毒素、10M-6 的异丙基肾上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生长因子（EGF）能促表皮细胞生长。
实验材料    皮肤血清
试剂、试剂盒    EDTA胰蛋白酶Eagle
仪器、耗材    血管钳吸管CO2温箱
实验步骤    
皮肤是皮表细胞培养来源，小儿包皮是皮肤表皮细胞培养的好材料。全皮培养时，表皮细胞与成纤维细胞混合生长，难以纯化。黑木登志夫（1981）用皮肤表皮和分离培养法可获纯上皮细胞，有一定参考价值，其法如下：
 
1.  取材

取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成 0.5~1 平方厘米小块；

2.  EDTA处理

先置入0.02 %EDTA 中室温置5 分钟；

3.  冷消化

换入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃过夜；

4.  分离

取出皮块，用血管钳或镊子把表皮与层分开；

5.  温消化

取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分钟；

6.  用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液；

7.  培养液

通过80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中，CO2温箱培养。

上皮细胞可来源于外，内、中三个胚层；但培养中只有源于外和内胚层的细胞能反映出上皮细胞的特征细胞呈膜状生长的特点。而间皮和内皮刚接种培养和细胞量少时常呈成纤维细胞型，只有细胞数量较多时，才能显出膜状特点。内容来源：组织培养和分子细胞学技术
实验方法原理    利于皮肤表皮细胞培养成功的因素有，在有胶原的底物上易生长；另有人发现把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）上时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低pH、Ca2+的含量和温度等，均利于表皮细胞生长。向培养基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍乱毒素、10M-6 的异丙基肾上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生长因子（EGF）能促表皮细胞生长。
实验材料    皮肤血清
试剂、试剂盒    EDTA胰蛋白酶Eagle
仪器、耗材    血管钳吸管CO2温箱
实验步骤    
皮肤是皮表细胞培养来源，小儿包皮是皮肤表皮细胞培养的好材料。全皮培养时，表皮细胞与成纤维细胞混合生长，难以纯化。黑木登志夫（1981）用皮肤表皮和分离培养法可获纯上皮细胞，有一定参考价值，其法如下：
 
1.  取材

取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成 0.5~1 平方厘米小块；

2.  EDTA处理

先置入0.02 %EDTA 中室温置5 分钟；

3.  冷消化

换入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃过夜；

4.  分离

取出皮块，用血管钳或镊子把表皮与层分开；

5.  温消化

取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分钟；

6.  用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液；

7.  培养液

通过80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中，CO2温箱培养。

收起 
注意事项    
冷消化目的在于使表皮和结合松散，如冷消化后分离下来的表皮膜自身也已松散，此时亦可直接置入PBS中用吸管吹打制备细胞悬液；不再经过第二次消化。
其他    
皮肤表皮培养亦可用全皮消化法或组织块培养法培养。用胶原酶消化为好，它对结缔组织有较强消化作用，对表皮细胞损伤小，但成纤维细胞易与上皮细胞同时生长，在这种情况下，需做排除成纤维胞处理。血清中含有血小板来源的生长因子（PDGF），易促成纤维细胞的生长；如用好的、不含PDGF的无血清培养基培养可能更好。

收起 
注意事项    
冷消化目的在于使表皮和结合松散，如冷消化后分离下来的表皮膜自身也已松散，此时亦可直接置入PBS中用吸管吹打制备细胞悬液；不再经过第二次消化。
其他    
皮肤表皮培养亦可用全皮消化法或组织块培养法培养。用胶原酶消化为好，它对结缔组织有较强消化作用，对表皮细胞损伤小，但成纤维细胞易与上皮细胞同时生长，在这种情况下，需做排除成纤维胞处理。血清中含有血小板来源的生长因子（PDGF），易促成纤维细胞的生长；如用好的、不含PDGF的无血清培养基培养可能更好。

收起 
注意事项    
冷消化目的在于使表皮和结合松散，如冷消化后分离下来的表皮膜自身也已松散，此时亦可直接置入PBS中用吸管吹打制备细胞悬液；不再经过第二次消化。
其他    
皮肤表皮培养亦可用全皮消化法或组织块培养法培养。用胶原酶消化为好，它对结缔组织有较强消化作用，对表皮细胞损伤小，但成纤维细胞易与上皮细胞同时生长，在这种情况下，需做排除成纤维胞处理。血清中含有血小板来源的生长因子（PDGF），易促成纤维细胞的生长；如用好的、不含PDGF的无血清培养基培养可能更好。