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分离或耗尽人CD4+T细胞-全血,Buffy Coat,MNC
阅读:417 发布时间:2018-7-17DyabeADS®与管内的细胞样品混合。DyabeADS®将在短时间内与靶细胞结合,然后通过磁体分离珠结合细胞。
正隔离-丢弃上清液,并使用珠结合细胞用于下游分子应用。
耗尽-丢弃被绑定的细胞,并将剩余的未触及的细胞用于任何应用程序。
磁铁(dynal®mpc™)
给出了W-C-倾斜模和两个混频器之间的旋转。
缓冲液:0.1% 1 W / BSA和2毫米EDTA,pH值为7.4。
实验步骤
1。dynabeads®洗涤过程
dynabeads®酸洗前应使用。
1)《dynabeads®resuspend在瓶。
(2)转移到所需的dynabeads®卷一管。
3)将存储在相同的卷1,或至少1毫升,和混合。
4)在一个灌注管和磁铁1分钟的supernatant丢弃。
5)把管从磁铁和在相同的dynabeads®resuspend酸洗卷(1卷)公开发行(IPO)作为缓冲dynabeads®(步骤2)。
2。样品的制备
可以直接从任何孤立的细胞样本,如全血,骨髓组织,跨国公司或消化。
请访问我们的www.invitrogen。。com / cellisolation和后续的样品制备过程是快速的。
3。整个血液和巴菲大衣
消耗和积极的隔离的CAN使用捉鬼大衣与整个血液样本作为一个开始。巴菲大衣是8比10倍更多的集中到整个血与leucocytes数。这个产品你要洗血/捉鬼大衣删除干扰性因素。
1)整个血液捉鬼大衣或稀在缓冲区1(1,2)。
2)在centrifuge 600 x g的10分钟在2~8°C。
3)等离子层的部分取消/上层。resuspend血到原始卷捉鬼大衣在缓冲区1和1 1 1添加在缓冲区之前的磁珠。
4。减少的CD4阳性T细胞的分离。
1)添加适当的准备样品dynabeads®卷(根据表1。
2)incubate 20 min(隔离)或30分钟(消耗)在2°C给出了W-C-倾斜模和旋转与温柔。
3)在灌注管一磁铁2分钟。
(4)减少,转移到新管supernatant进一步使用。
(5)积极的分离,取消supernatant沐浴剂的beadbound细胞在缓冲区3 resuspending时报由1到原始样品的体积,和单独使用一个磁铁1分钟。不要使用小于1毫升缓冲在每个洗涤步骤1。生物分子研究,裂解细胞在安静和附加到珠转移到一个新的管supernatant蛋白或基因表达分析。
注意事项
关键步骤的细胞分离
1。给出了W-C-倾斜模和混频器的使用提供一个旋转的管dynabeads®确保不定居在底部管。
2。当incubating dynabeads®和细胞,孵化温度2°C,必须减少吞噬活动和其他代谢过程。
3。不要使用少于25µL(1×107)dynabeads®每毫升细胞样品和至少4 dynabeads®通过靶细胞。