人正常乳腺细胞MCF10A培养说明

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培养操作及注意事项说明
人正常乳腺细胞MCF10A培养说明一．产品简介
1、细胞名称：MCF10A；人正常乳腺细胞
2、生长特性： □ 贴壁□ 悬浮□悬浮+贴壁
3、细胞生长条件：
培养条件DMEM/F12(1:1) 培养基+马血清（5%）
+胰岛素（10ug/ml）+表皮生长因子
(20ng/ml)+霍乱毒素(100ng/ml)+氢
化可的松（0.5ug/ml）
温度37℃
空气条件5% CO2,95% AIR
传代方法1:2 传代，2~3 天换液
冻存条件90%FBS+10%DMSO
4、背景资料：该细胞是一株不致瘤的上皮细胞株，对唾液酸蛋白，细胞角蛋白
及乳脂肪球抗原阳性。细胞在胶原中三维生长，并形成圆顶状的汇合细胞。
人正常乳腺细胞MCF10A培养说明二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2 培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2
细胞培养箱中静置3-4 小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养
或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用
PBS 清洗细胞一次；
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2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后
将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml *培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传
代，后放入37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用
PBS 清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将
悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转
入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃
水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml *培养基的15ml 离心管中， 1000rpm
离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml *培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO2
细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。