小鼠脑微血管内皮细胞Bend.3培养说明上海雅吉生物科技有限公司

培养操作及注意事项说明
一．产品简介
1、细胞名称：Bend.3；小鼠脑微血管内皮细胞
2、生长特性： □ 贴壁□ 悬浮□半悬浮半贴壁
3、细胞生长条件：
培养条件DMEM(高糖）+10%FBS+1%双抗
温度37℃
空气条件5% CO2，,95% AIR
传代方法1:2 传代，2~3 天换液
冻存条件90%FBS+10%DMSO
4、背景资料：该细胞转染了NTKmT 逆转录病毒载体，表达多瘤病毒中T 抗原。
血管性血友病因子的分泌和吸收荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）证实了该细胞
株的内皮细胞特性。细胞因子和脂多糖（LPS）可诱导细胞分泌MAdCAM-1 和E
选择素。TNF-α、IL-1 和LPS 的诱导是时间和浓度依赖。早代数的未刺激细胞
会分泌MAdCAM-1 和VCAM-1，但找过30 代不分泌。细胞会组成型分泌ICAM-1，
并且表达量会在LPS、IL-1 和TNF-α刺激下增多。P 选择素在早代数和晚代数细
胞中受TNF-α诱导分泌，但30 代后分泌量增加。
小鼠脑微血管内皮细胞Bend.3培养说明二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2 培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2
细胞培养箱中静置3-4 小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养
或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用
上海雅吉生物科技有限公司
第2 页共2 页
PBS 清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后
将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml *培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传
代，后放入37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用
PBS 清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将
悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转
入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃
水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml *培养基的15ml 离心管中， 1000rpm
离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml *培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO2
细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。小鼠脑微血管内皮细胞Bend.3培养说明