李斯特菌检测板

李斯特菌检测板原理及适用范围
是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，选择性试剂，冷水可溶性吸水凝胶和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的显色底物( X-GLU )，适用于检测或者计数食品及环境样品中的李斯特菌菌数。检测的李斯特菌包括单核细胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes)，英诺克李斯特菌(Listeria.innocua)，威氏李斯特菌(Listeria.welshi)，但不能区分各种菌。
李斯特菌检测板操作方法
2.1 食品样品检测
2.1.1  食品样品处理：取样品25 g(mL)放入装有225mL灭菌磷酸盐缓冲液（或生理盐水）的取样罐或均质袋内，制成1:10的样品匀液。根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液，选择2～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）来进行接种。 
2.2 环境样品检测
2.2.1  环境样品采集：用无菌的涂抹棒或其他采样设备收集环境样品。湿润采样设备液体体积≤10mL。湿润剂可以为无菌水，灭菌生理盐水（磷酸盐缓冲液）或者缓冲蛋白胨水。
2.2.2  环境样品处理：在收集的环境样品中添加10mL 灭菌生理盐水（或磷酸盐缓冲液），充分混匀。根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）来进行接种。 
2.3 接种：将检测板上层膜不干胶标签部分揭开，用无菌吸管吸取1 mL样品匀液均匀滴加到纸片上，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，静置10s左右，待样品匀液*被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两个检测板作为重复。
2.4 培养：将检测板叠在一起，倒置于36℃±1℃恒温培养箱内，培养18～24h
3、结果判读
在检测板上生长的蓝绿色点即为李斯特菌阳性点，若检测板上无菌生长或者长出点为其他颜色点即为李斯特菌阴性。
计数原则及报告方式
4.1  样品计数
4.1.1 以生长有30～300CFU的检测板为计数适宜范围。
4.1.2 若只有一个稀释度检测板上的菌落数在计数合适范围30～300CFU之间，则计算两个检测板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每克（毫升）中菌落总数结果。
4.1.3 若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式（1）计算：
                     ∑C
               N= ————————       •••••••••••••••••••（1） 
                   （n1+0.1n2）d
   式中：
   N——样品中李斯特菌菌落数；
   ∑C——两个连续稀释度检测板（含适宜范围菌落数的检测板）李斯特菌落数之和；
   n1——适宜范围菌落数的*个稀释度（低）检测板个数；
   n2——适宜范围菌落数的第二个稀释度（高）检测板个数；
   d——*稀释度的稀释倍数
 示例：

结果表述为2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若所有稀释度检测板上均无菌落生长，则以小于1/d（d—zui低稀释倍数）计算。
4.1.5 低数值的估算：如果实验样品原液（水及液体饮料）或初始稀释悬液（其他样品）的两个检测板上的菌落数均小于30CFU，计算两个检测板上的菌落数的平均数。计算式（2）：
                    ∑C
                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）
                        nd
式中：
NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；
∑C——两个检测板上菌落数的和；
n——检测板的数量；
d——样品初始悬液或实际接种悬液的稀释倍数。
4.1.6 大数值的估算：若所有稀释度的检测板上菌落数均大于300CFU，计数zui接近300CFU的检测板上的菌落并计算出平均数，其他检测板可记录为多不可计。结果计算式（3）：
                     ∑C
                NE = —— •••••••••••••••••••（3）
                      nd
式中：
NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；
∑C——两个检测板上菌落数之和；
n——检测板的数量；
d——与样品悬液相*的稀释倍数。