基因型

F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)pLysSCamR

简要说明

OverExpress C43(DE3)、OverExpressC41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpress C43(DE3)来源于OverExpressC41(DE3)，是通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。将具有lu霉素抗性的pLysS质粒导入C43(DE3)细胞中即是C43(DE3) pLysS，pLysS表达T7 yu菌酶，T7 yu菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。C43(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。

操作说明

1、C43(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/mllu霉素及所选质粒筛选抗生素的LB培养基上。

 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养

注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。 

5. C43(DE3)pLysS 菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml lu霉素，以防质粒丢失。