基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

简要说明

OrigamiB(DE3)感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB)和gu胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有ka那霉素和四环素抗性，不能用于具有ka那霉素抗性质粒的表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达

操作说明

1、取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

 3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

 6.具有ka那霉素抗性，不能用于具有ka那霉素抗性质粒的表达。