基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS(CamR)

简要说明

BL21Star(DE3)pLysS 菌株来源于BL21(DE3)，含有rne131突变（RNaseE基因），RNaseE 基因的突变降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA 的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7 启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌 RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体（pGEX，pMAL等）的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带pLysS 质粒，具有氯lu素抗性。pLysS 含有表达 T7溶jun酶的基因，T7溶jun酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达。pLysS 质粒含有p15A复制起始子，可以和含有 pUC或 pBR322 等复制起始子的质粒兼容。BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。

操作说明

1、BL21 Star(DE3)pLysS 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拍EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激 45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

 3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃， 200 rpm 复苏60 分钟。

4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。-

注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM 均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34µg/ml氯lu素，以防质粒丢失。