基因型

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr

简要说明

BL21(DE3)pLysS 感受态细胞携带pLysS质粒，具有氯mei素抗性。pLysS含有表达T7 溶jun酶的基因，T7溶jun酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

操作说明

1. 取100μl冰上融化的BL21(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

   2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

   3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟

   4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯mei素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。 

   5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

   2.混入质粒时应轻柔操作。

   3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

   4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）

   5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

   6.BL21(DE3)pLysS 菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34µg/ml氯mei素，以防质粒丢失。