人角膜内皮原代细胞

人角膜内皮原代细胞

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵"功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。

方法简介：

公司实验室分离的人角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人角膜内皮细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　　② 消化培养法

　　③ 悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

　　④器官培养

　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。(该细胞传代次数有限约 2 代，建议客户收到细胞后尽快安排后续实验)

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培养箱中静置 6-8 小时，以稳定细胞状态。

2、待细胞达到 80%汇合时准备进行传代培养。

3、细胞传代：

1)吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。

2)加入 0.125%消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 3min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入培养液终止消化。

3)用吸管轻轻吹打混匀，按 1:2 或 1:3 等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的培养基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养。

4)待细胞贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的培养基。

CHO-AA8细胞，转入Tet-off调控含EGFP基因的CHO细胞 H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞) 615小鼠前胃癌瘤株;Fc  人纤维环细胞HAFC  SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞 小细胞肺癌细胞,NEI-H209细胞 ECV304(人脐静脉内皮细胞株) 小鼠原代心脏微血管内皮细胞 大鼠原代腹膜间皮细胞

糖蛋白130(gp130)重组蛋白 Recombinant Glycoprotein 130 (gp130)

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 (His & Fc 标签)

LAYN重组人 Layilin / LAYN 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H1N2 重组甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CLEC2B重组人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 标签) Protein

兔子促黄体激素(LH)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cadherin complex (VE-cad) ELISA Kit 人血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)试剂盒

Humanai-neuophilaibody,ANAELISAKit 人抗中性粒细胞抗体(ANA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanerythrocytemembraneprotein,EMP试剂盒人红细胞膜蛋白(EMP)试剂盒规格：96T/48T

组织RSE激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

HumanOsteoprotegerin，OPGELISAKit人骨保护素(OPG)试剂盒规格：96T/48T

人转录因子   英文名称：   Human Engrailed-2   规格：      

E选择素   英文名称：   Human E selectin   规格：        

上皮钙粘蛋白   英文名称：   Human E.cadherin   规格：    cn

内皮素受体A   英文名称：   Human Endothelin Receptor A   规格：      英文缩写：   EA

人角膜内皮原代细胞豚鼠干扰素α(IFNα)试剂盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人钙离子通道抗体(VGCC)试剂盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封闭抗体

线虫基因组DNA分离试剂盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)试剂盒规格：96T/48T

CXADR重组小鼠 CXADR / CAR 蛋白 Protein

骨成型蛋白2(BMP2)重组蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)

PDHA1重组人 PDHA1 / C54G1 蛋白 (aa 30-390, His & GST 标签) Protein

CEACAM3 Protein Human 重组人 CEACAM3 / CD66d 蛋白

TGFB2 Protein Canine 重组狗 TGFB2 / TGF-beta 2 蛋白