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产品名称 | 规格 | 保存条件 |
Phospho-EEF2k (Ser359)抗体 | 50ul 100ul 200ul | Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. |
产品分类:抗体 / 一抗
英文名称:Phospho-EEF2k (Ser359)
中文名称 磷酸化真核延伸因子激酶2抗体
英文别名 EEF2K (phospho S359); p-EEF2K (phospho S359); Calcium/calmodulin dependent eukaryotic elongation factor 2; Calcium/calmodulin dependent eukaryotic elongation factor 2 kinase; Calmodulin dependent protein kinase III; cb365; eEF 2 kinase; eEF 2K; EEF2K protein; Elongation factor 2 kinase; Eukaryotic elongation factor 2 kinase; kinase eEF2K; SMEF2K; EF2K_HUMAN.
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Horse, Rabbit, Sheep
标记: Unconjugated
抗体来源: Rabbit
抗体类型: Polyclonal
免疫原 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human EEF2k around the phosphorylation site of Ser359
蛋白细胞定位: 细胞浆
纯化方法: affinity purified by Protein A
亚型 IgG
性状: Liquid
浓度: 1mg/ml
储存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glyc
背景资料:Eukaryotic elongation factor 2 kinase (EEF2k) previously known as Ca2+/calmodulin dependent protein kinase III, is an abundant cytoplasmic protein highly specific for elongation factor 2 (eEf2). Phosphorylation of eEF2 by eEF2 kinase on specific threonine residues results in the inactivation of eEF-2 and in termination of mRNA translation. The activity of eEF2 kinase is not only dependent upon Ca2+ ions, calmodulin (CaM) and insulin, but is also regulated both negatively and positively via phosphorylation by different protein kinases (AMPK, S6K1, p90 RSK). There is also evidence that eEF-2 phosphorylation is involved in the regulation of cell cycle progression, cellular differentiation, oosis and malignant tumors.
抗体制备过程:
1.材料与试剂
a.提取的动物 Ig
b.弗氏佐剂和弗氏不佐剂
d.实验动物 兔
e.其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。
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抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
标记法:
直接标记法 | 间接标记法 |
抗体的准备:取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量,置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液,冰槽中搅拌5~10min; 荧光素的准备:按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算,准确称取后加入抗体溶液中; 标记:边搅拌边加入荧光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h; 透析:结合完毕后,先将结合物以3000r/min离心20min,除去少量沉淀物后装入透析袋中再置于pH8.0缓冲盐的烧杯中透析过夜; 过柱:取透析过夜的标记物,过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱,分离游 | 抗体的准备:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS将待标记的抗体蛋白溶液稀释到浓度为30~40mg/ml,置于三角烧瓶内放入冰槽中; 荧光素的准备:按每毫克蛋白质加入0.01mg的荧光素称取,溶解于等量的3%重碳酸钠水溶液中;将抗体蛋白溶液与FITC溶液等量混合,在0~4℃中搅拌18~24h,充分搅匀; 透析或过柱层析。 |
实验步骤:
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。
② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不时振荡。
④ 取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+"表示:
(-)无荧光;(±)极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱,但清楚可见;(++)荧光明亮;(+++ --++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++"以上,而各种对照显示为(±)或(-),即可判定为阳性。
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factor V: 5抗体 0.1ml
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