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详细介绍
商品介绍：
PKH67/PI 双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料PKH67和PI对细胞进行染色，利用PKH67标记靶细胞，PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞，活的靶细胞成绿色，死的靶细胞成红色和绿色，从而检测细胞毒性作用。 根据不同的实验方案设计，可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T 细胞或NK 细胞介导的细胞毒作用。 荧光染料PKH67是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。对细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。 在细胞分裂增殖过程中，PKH67的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH67可检测分裂次数多达六次甚至更多。 除了用于细胞增殖检测，PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪，标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。 PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。 PKH67/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。 PKH67标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=490 nm,λem=502 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为502nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光，流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为647nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。 PKH67标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外，还可单染后用于细胞增殖检测，或者用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。 储存条件：-20℃避光保存。 |
产品属性：
中文名称：PKH67/PI双染细胞毒性检测试剂盒
英文名称：
产品规格：500T
发货周期：1～3天
公司产品仅用于科研
细胞生物学研究有以下几个方面：
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括：
①细胞核、染色体以及基因表达的研究；
②生物膜与细胞器的研究；
③细胞骨架体系的研究；
④细胞增殖及其调控；
⑤细胞分化及其调控；
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)；
⑦细胞的起源与进化；
⑧细胞工程.
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
Pregnenolone(标准品)英文名称： 6-TG/ThioguanineCD9蛋白抗体包装100g
Progesterone（标准品）英文名称： 6-TG/ThioguanineCD23/FcεRII抗体包装25g
Promestriene(标准品)英文名称： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD27抗体包装500g
RNH-奥美沙坦酯杂质（标准品）英文名称： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD30抗体包装25g
Rosiglitazone HCL (标准品)英文名称： BicalutamideCD43抗体包装5g
Rosiglitazone Maleate（标准品）英文名称： BicalutamideCD48抗体包装1g
Rosiglitazone（标准品）英文名称： Busulfan/MyleranCD44抗体包装5g
Sitagliptin phosphate monoh...英文名称： Busulfan/Myleran整合αX抗体包装100g
Sivelestat sodium (标准品)英文名称： Lomustine表面趋化因子受体5抗体包装25g
Sorafenib tosylate（标准品）英文名称： LomustineCD2抗体包装25g
Stanozolol（标准品）英文名称： Hydroxyurea/HydroxycarbamideC-肽抗体包装5g
Tamoxifen Citrate （标准品）英文名称： Hydroxyurea/Hydroxycarbamide钙结合蛋白抗体包装1g
Tetrabenazine(标准品)英文名称： Toremifene CitrateC-反应蛋白抗体包装5g
Toremifene Citrate（标准品）英文名称： Toremifene CitrateC-反应蛋白单克抗体包装100g
Triamcinolone Acetonide(标准品...英文名称： Toremifene Citrate环腺苷应答元件结合蛋白抗体包装25g
产黑假交替单胞菌Pseudoalteromonas│nigrifaciens 质量规格：HPLC>98%,标准品血管抑/血管稳定蛋白试剂盒血竭;Cochinchinenin
ATCC35674资源名称: 自养黄色杆菌 质量规格：>98%,5-HT2A高效选择性激动剂血管性血友病因子裂解试剂盒西贝母碱苷;Sipeimine-3β-D
耐热克鲁维酵母Kluyveromyces│thermotolerans 质量规格：>99%血管舒缓激肽试剂盒绣球酚 ;Hydrangenol
PKH67/PI双染细胞毒性检测试剂盒酿酒酵母 2-氯-4-氨基-6,7-二甲氧基喹唑啉丝聚合蛋白Elisa
印度芽孢杆 2-乙基-6-甲基-3-羟基吡啶腺病IgM抗体Elisa
枯草芽孢杆 4-溴-2-酚过氧化物3Elisa
棘孢木霉 2-氟-2-磷酰基乙酸三乙酯低氧诱导因子2Elisa
外皮毛霉 4-苯基-2-丁诺如病Elisa
酿酒酵母 α-异丁酸甲酯甘油三磷酸脱氢Elisa
阿尔通山碱线 4-氟苯甲脒盐酸盐激活BElisa
发根土壤杆 4-氟-3-甲低密度脂蛋白复合物Elisa
芽孢杆属 3,4-二氟苯酮Egl九同源物Elisa
矩圆黑盘孢 N-正辛基-D-葡萄糖甘油三磷酸脱氢Elisa
假单胞 磺氯哒钠百日咳IgG抗体Elisa
海水盐单胞 6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉 盐酸盐硒蛋白P1Elisa
膜醭毕赤酵母 2-溴-3-甲基-5-硝基吡啶EB病IgA抗体Elisa
卷枝毛霉 2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶脯氨酰羟化Elisa
酿酒酵母 反-1,2-环己烷二甲酸脯氨酰羟化2Elisa
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