详细介绍
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
ELISA Kit检测试剂盒优点多,更加方便我们的科研学者进行科学实验,是科研实验的好伙伴。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
ActivinA ELISA Kit | GOY-E100242 |
实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
注意事项:
1.加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
3,6-二基菲(>95.0%(GC)) 质量规格:>95.0%(GC) 3,6-Dimethylphenanthrene 大鼠成纤维细胞*培养基三叶草根瘤菌 Rhizobium trifolii
β-淀粉样蛋白(1-42),人 质量规格:>95%,BR β-Amyloid Peptide (1-42), human 香菇 Lentinula edodes苜蓿中华根瘤菌
山栀苷酯 订购|咨询 规格: HPLC≥98%;20mg DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体 RXFP1 ELISA Kit 松弛素/胰岛素样肽受体1(RXFP1)ELISA试剂盒
规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 ELISA Kit for Human Puromycin-sensitive aminopeptidase大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒,英文名:PCNA ELISA Kit
七叶皂苷 IIa;Escin IIa 订购|咨询 规格: 10mg 桥粒糖蛋白4抗体 RCN2 ELISA Kit 网钙蛋白2(RCN2)ELISA试剂盒
阿托伐他汀 质量规格:美国进口 Atorvastatin T-24(人膀胱细胞)5×106cells/瓶×2
对二 订购|咨询 规格: 100mg 中心体蛋白128抗体 FMN2 ELISA Kit 形成素2(FMN2)ELISA试剂盒
盐巴马汀,盐掌叶防己碱(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Palmatine hydrochloride 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae无花果曲霉 Aspergillus ficuum
(R型)人参皂苷Rh2 订购|咨询 规格: HPLC≥98%;20mg 钙结合蛋白样39抗体 RELM-β ELISA Kit 抵抗素样分子β(RELM-β)ELISA试剂盒
氯喹(标准品) 质量规格:HPLC法含量测定 Chloroquine diphosphate 爪哇根霉 Rhizopus javanicus大鼠肝内胆管上皮细胞*培养基
帕米二钠盐 质量规格:美国进口 Pamidronate, Disodium Salt PYG液体培养基基础/PYG Broth Base双岐杆菌增菌培养250克国产/进口
东莨菪内酯;莨菪亭,莨菪亭,东莨菪素 英文名称:Scopoletin; scopoletin scopoletin scopoletin,, 保存:-20℃ 规格:HPLC≥98% 20mg/支 紧密连接蛋白2抗体
阿魏 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 人高密度脂蛋白胆固(HDL-C)ELISA试剂盒人96T12.5-800 ng/mL小鼠对氧酶1(PON1)ELISA试剂盒,英文名:PON1 ELISA Kit
Activin-A活化素AELISA Kit牛心汤培养基 250(g)
营养琼脂(NA) 250(g)
W.L.营养肉汤 (CM0501) Oxoid
Mueller-Hinton 琼脂 (CM0337) Oxoid
胰酶-EDTA,
0.05%胰酶,EDTA。4Na 不含钙镁离子,含酚红
保存:-5 - -20°
假单细胞分离琼脂 用甘油在色素形成基础上选择分离、鉴别铜绿假单胞菌500g
LB broth acc.to MILLER LB琼脂 1.10285.0500MERCK默克
查普曼琼脂/葡萄状球菌选择琼脂
卵磷脂吐温80营养琼脂 250(g)
碱性蛋白胨水(APW) 250(g)
马铃薯琼脂 100(g)