KMB-17 细胞专用培养基

细胞实验步骤：

一、细胞复苏

1.将10ml移液管、移液枪、1ml枪头、50ml离心管、T25培养瓶、酒精灯、废液缸等物品放入超净工作台，紫外灯照射30min后再通风30min；

2.预热培养基；

3.用75%酒精消毒后放入超净工作台；

4.将冻存细胞从液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴锅中快速晃动使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超净工作台；

7.吸取9ml培养基到50ml离心管中；

8.用1ml枪头吸取解冻的细胞悬液于离心管中；

9.1000r/min,离心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超净工作台；

11.吸弃上清液；

12.吸取1ml培养基重悬细胞，将细胞悬液转移到培养瓶内，补加适量培养基，轻轻晃动培养瓶使细胞分布均匀，并做好标记；

13.在显微镜下观察复苏的细胞密度及状态；

14.将细胞放回二氧化碳培养箱中静置培养。

商品属性：

产品介绍

KMB-17细胞培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持KMB-17细胞优良的生长状态。

本产品中已包含KMB-17 细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于KMB-17 细胞的培养。

产品主要成分

MEM 基础培养基                                   445 mL

特级胎牛血清                                    50 mL

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；׏

注意事项：

仅限科研用。

培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。

细胞培养步骤：

‌细胞复苏‌：

从液氮罐中取出冻存细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。

解冻后，将细胞转移到含有新鲜培养基的培养皿中，轻轻摇动使细胞均匀分布。

放入37℃、5%CO2的培养箱中培养。

‌细胞换液‌：

吸除或倒掉培养皿内的旧培养液。

加入PBS缓冲液，轻轻漂洗细胞，以去除悬浮在细胞表面的碎片，重复几次。

加入新的培养基。

‌细胞传代‌：

当细胞长到80%~90%时，进行传代。

吸除或倒掉瓶内旧培养液，加入PBS缓冲液漂洗。

加入消化液，轻轻摇动使消化液流遍所有细胞表面。

将培养瓶放入37℃培养箱中静止几分钟，观察细胞变化。当细胞间隙增大后，加入含有血清的培养液终止消化。

吹打细胞使其成为悬液，转移到离心管中离心。

弃上清，加入适量的细胞培养液重悬细胞。

按比例分装到新的培养皿中，补加新鲜培养基。

做好标记，放入37℃、5%CO2的培养箱中培养。

‌细胞冻存‌：

选择对数生长期的细胞进行冻存。

将细胞转移到离心管中离心，弃上清。

加入适量的冻存液（如90%的培养基+10%的DMSO），轻轻吹打重悬细胞。

将细胞转移到冷冻保存管中，标记后放入程序降温盒，再放入-80℃冰箱冻存。几小时后或过夜转至液氮罐保存。

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