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详细介绍
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| 293T/17 (胚肾细胞) | 1×10⁶cells/T25培养瓶 | GOY-01X0465 |
商品介绍：
名称 293T/17 (胚肾细胞) 别称HEK 293T/17; 293T/17 种属人类 年龄（性别）胎儿 组织来源肾 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述293T/17细胞株是293T细胞株的衍生株，293T是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。293T细胞进行克隆，检测pBND和pZAP载体，得到一株能生成高滴度感染逆转录病毒的衍生株293T/17细胞。293T/17细胞持续表达猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高转染能力筛选到17号克隆。293T/17细胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2载体转染得到ANJOU65细胞株，ANJOU65细胞再用pCRIPgag-2和pGPT2E载体转染得到亲宅性外壳表达细胞株BOSC 23。ANJOU65细胞用携带gpt抗性基因的pCRIPAMgag载体转染得到Bing双向性表达包装细胞株。 生物安全等级2 生长培养基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 注意事项该细胞贴壁松散，操作时请尽量轻柔；换液时需预热培养基；收货如有大块脱落的细胞团，为正常现象，请按照收货注意事项处理。 |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
ADAP2 基因全长ORF克隆
B3GALT4 基因全长ORF克隆
PEX14 基因全长ORF克隆
AGPAT3 基因全长ORF克隆
FBLIM1 基因全长ORF克隆
HSD3B2 基因全长ORF克隆
ACOT7 基因全长ORF克隆
OPRL1 基因全长ORF克隆
DRG1 基因全长ORF克隆
ACTL8 基因全长ORF克隆
293T/17 (胚肾细胞) 100mL Tricine Buffer,0.5M pH6.5 Tricine Buffer,0.5M pH6.5 常温保存
30µL HRP标记内参抗体（GAPDH）
250mL Sodium Borate Buffer（硼酸钠缓冲液）,0.5M,pH8.0 Sodium Borate Buffer,0.5M,pH8.0 常温保存
100g RNPVP K30 (聚乙烯咯烷酮K30) 常温
2 ug pEBFP-N1 pEBFP-N1 低温运输，-20℃保存
CDC厌氧菌琼脂 CDC Anaerobic Agar 250g
25g 葡聚糖凝胶 LH-20 Sephadex LH-20 室温保存
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