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详细介绍
公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | HK-2 (肾皮质近曲小管上皮细胞) |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X0108 |
产品介绍：
名称 HK-2 (肾皮质近曲小管上皮细胞) 别称Hk-2; HK2; Human Kidney-2 种属人类 年龄（性别）成人 组织来源肾，皮质/近端小管 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。 生物安全等级2 生长培养基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 受体表达情况epidermal growth factor (EGF), expressed 基因表达情况alkaline phosphatase; gamma glutamyltranspeptidase; leucine aminopeptidase; acid phosphatase; cytokeratin; alpha 3, beta 1 integrin; fibronectin |
细胞特点及处理：
产品特点: 1、 使用方便:不需昂贵设备。 2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。 3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。 5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。 | 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
细胞培养技巧：
一、冻存时的注意事项： 1. 在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％最佳 2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。 3. 使用的DMSO 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽 灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 4. 冷冻保存的细胞浓度： 4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。 4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。
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使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。 1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。 2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。 3. 细胞传代 1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次； 2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化； 3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养； 4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。 |
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