Caco-2 (结直肠腺癌细胞)

产品名称

名称    Caco-2 (结直肠腺癌细胞)

别称CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC

种属人类

年龄（性别）男性，72岁

组织来源结肠，结直肠腺癌

生长特性贴壁细胞

细胞形态上皮细胞样

背景描述Caco-2细胞分离自直肠原位癌；当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。

生物安全等级1

生长培养基MEM＋20% FBS＋1% P/S

推荐传代比例1:3-1:4

推荐换液频率2~3次/周

倍增时间~60-80小时

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

致瘤性Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade II).

受体表达情况This cell line expressed heat stable enterotoxin (Sta, E. coli) and epidermal growth factor (EGF).

基因表达情况keratin, retinoic acid binding protein 1, retinol binding protein 2

注意事项1. 细胞贴壁慢特别是刚复苏时，一般两到三天贴壁展开，会有空泡； 2. 细胞在传代细胞中注意消散，不然难贴壁； 3. 成团生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多； 4. 一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大； 5. 细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡； 6. 细胞生长时间越久，消化难度也会随之增加；消化到轻拍培养瓶侧边细胞可以滑落的时候可以终止。

产品特点:

1、 使用方便:不需昂贵设备。

2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

一、冻存时的注意事项：

1. 在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％最佳

2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽

灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。

4. 冷冻保存的细胞浓度：

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。