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详细介绍
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌细胞) | 1×10⁶cells/T25培养瓶 | GOY-01X0177 |
商品介绍：
名称 NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌细胞) 别称Ovcar-3; NIH:OVCAR-3; NIH:Ovcar-3; NIH:OVCAR3; NIH-OVCAR-3; NIHOVCAR3; OVCAR.3; OVCAR3; Ovcar3 种属人类 年龄（性别）女性，60岁 组织来源卵巢腺癌 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]细胞是由T·C·Hamilton在1982年建系，NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]细胞取材于患进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]细胞与107细胞联合皮下接种5只裸鼠21天后全部成瘤。NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]细胞是研究卵巢癌药物抗性的一个合适的模型系统且由于存在激素受体，这对于激素治疗的评估或许是有用的。 生物安全等级1 生长培养基RPMI-1640＋20% FBS＋0.01mg/ml Insulin＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~35-64小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 致瘤性Yes, Forms colonies in soft agar. Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5)). 受体表达情况Androgen receptor, positive; estrogen receptor, positive; progesterone receptor, positive |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
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NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌细胞) 1次 96孔板病毒RNAout（离心法） 96 Microwell Plate Vrial RNAOUT 4℃保存
2 ug pCMV-dR8.91 pCMV-dR8.91 低温运输，-20℃保存
TTC琼脂基础 TTC Agar Base 250g
1Mu G 钾盐 Penicillin G K Salt 室温干燥保存
肝浸粉 Liver Infusion 100g
5 mg AICAR （AMPK激活剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.0 CHES Buffer,0.5M,pH9.0 常温保存
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