详细介绍
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
大鼠腮腺细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X0763 |
商品介绍:
名称 大鼠腮腺细胞 2.组织来源:腮腺组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠腮腺细胞分离自腮腺组织;腮腺是哺乳类动物口腔中位于下颌角处的最大唾液腺,位于外耳道的前下方,下颌后窝内及下颌支的深面。腮腺也是某些无尾目动物颈部有毒皮肤腺的聚集体;唾液腺有3对,腮腺、舌下腺和颌下腺,其中最大的一对是腮腺。腮腺细胞是高度分化的上皮源性细胞,是一种营养需要复杂、在一般合成培养基中不易生长,体外培养比较困难。目前,DMEM培养液被认为较适于腺细胞的培养。加入一定量的血清更有利于细胞的生长、增殖与分化。另外,接种的细胞密度也是培养成功的关键因素之一,尤其是在腺细胞这种单层细胞培养时,接种的细胞总数量和生长基质表面的细胞密度对整个细胞的生长均有影响。 5.方法简介: 实验室分离的大鼠腮腺细胞采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化后差速贴壁,结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: 实验室分离的大鼠腮腺细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R019 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性可传1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
CD4 基因全长ORF克隆
APOBEC2 基因全长ORF克隆
IL6R 转录变体1 基因全长ORF克隆
IL20Ra 基因全长ORF克隆
TIMP2 基因全长ORF克隆
IL6 基因全长ORF克隆
PRKAA2 / AMPK 基因全长ORF克隆
PTGDS / PGD 基因全长ORF克隆
IL5Ra 转录变体2 基因全长ORF克隆
IL5Ra 转录变体1 基因全长ORF克隆
大鼠腮腺细胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Apolipoprotein C-IV
0.156-10 ng/mL 人髓磷脂相关糖蛋白(MAG)ELISA试剂盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human T-cell surface antigen CD2
0.156-10 ng/mL 人CXC趋化因子受体1(CXCR1/IL8Ra)ELISA试剂盒
0.312-20 ng/mL 人过氧化还原3(PRDX3)ELISA试剂盒
肉膏酵母葡萄糖琼脂 英文名称: 产品规格:250g
12.5-800 ng/mL 人高密度脂蛋白(HDL-C)ELISA试剂盒
31.2-2000 pg/mL 人CD5分子/套细胞淋巴瘤标记物(CD5)ELISA试剂盒
0.156-10 ng/mL 人CD98分子(CD98)ELISA试剂盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Epidermal growth factor-like protein 7