化工仪器网
详细介绍
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| KGN (卵巢颗粒细胞) | 1×10⁶cells/T25培养瓶 | GOY-01X0589 |
商品介绍：
名称 KGN (卵巢颗粒细胞) 种属人类 年龄（性别）女性，69岁 组织来源卵巢，腹膜 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 背景描述Granulosa cell tumor. Possible to produce progesterone after HCG addition. Cell growth is slow. 生物安全等级1 生长培养基DMEM/F12＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:4-1:6 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~46小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
PDYN 基因全长ORF克隆
NXPH3 基因全长ORF克隆
L大鼠 基因全长ORF克隆
TMED10 基因全长ORF克隆
IGLL1 基因全长ORF克隆
ALG14 基因全长ORF克隆
EDN1 基因全长ORF克隆
LPHN1 基因全长ORF克隆
LYG1 基因全长ORF克隆
C1ORF159 基因全长ORF克隆
KGN (卵巢颗粒细胞) 含225mlEC肉汤均质袋 英文名称： 产品规格：10个/包
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Beta-nerve growth factor
0.312-20 ng/mL 人黑色素聚集激素受体1(MCHR1)ELISA试剂盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Nociceptin receptor
78-5000 pg/ml 人旋光蛋白(OPTC)ELISA试剂盒
10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤 英文名称：10% NaCl Trypticase Soy Broth 产品规格：10ml*20支/包
红葡萄糖肉汤 英文名称：Phenol Red Dextrose Broth 产品规格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 28
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Chorionic somatomammotropin hormone
叠氮葡萄糖肉汤 英文名称： 产品规格：250g
化工仪器网