详细介绍
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
小鼠晶状体上皮细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X1063 |
商品介绍:
名称 小鼠晶状体上皮细胞 2.组织来源:晶状体组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠晶状体上皮细胞分离自晶状体组织;晶状体源自胚胎发育外胚层,仅含有上皮细胞及其产物,晶状体囊膜作为屏障将晶状体与其它类型细胞*分开;因而,晶状体上皮细胞培养既无神经和血管组织的干扰,又不受其它类型细胞如成纤维细胞的污染,保证了培养中细胞成分的单一性。晶状体上皮细胞主要负责调节晶状体的生理平衡,包括电解质和液体的输送。在正常的发育过程中,晶状体上皮细胞分化和成熟,然后迁移到晶状体内部,产生晶体蛋白,自身也拉长而变成晶状体纤维细胞,并最终失去细胞核和其它的细胞器。研究表明,晶状体上皮细胞的分化和极化受到了眼部液体中的生长因子的调控,包括表皮生长因子和胰岛素等。细胞贴壁后为扁平不规则多角形,呈单层生长、连成膜状。晶状体上皮细胞是紧密贴附于晶状体前囊内表面的单层上皮细胞,其异常增殖和分化与白内障和后囊混浊的发生密切相关,体外培养是研究其生长规律的主要手段。 5.方法简介: 实验室分离的小鼠晶状体上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: 实验室分离的小鼠晶状体上皮细胞经BFSP2(晶状体蛋白)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M119 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
食蟹猴 THBS1 基因全长ORF克隆
食蟹猴 CD155 / PVR 基因全长ORF克隆
食蟹猴 Thrombopoietin / THPO 基因全长ORF克隆
食蟹猴 SFTPD 基因全长ORF克隆
食蟹猴 CRP 基因全长ORF克隆
食蟹猴 TP53 基因全长ORF克隆
大肠杆 FABI 基因全长ORF克隆
大鼠 Neuropilin-1 基因全长ORF克隆
大鼠 EPO 基因全长ORF克隆
大鼠 PDGFB 基因全长ORF克隆
小鼠晶状体上皮细胞Korser氏肉汤 英文名称: 产品规格:20支
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Transcription termination factor 2
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Apolipoprotein C-I
0.39-25 ng/mL 人肾母细胞瘤蛋白1相互作用蛋白(WTIP)ELISA试剂盒
0.625-40 ng/mL 肾上腺素(Epinephrine)ELISA试剂盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Cyclin-dependent kinase 2
1.25-80 ng/mL 百日咳杆菌(BP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
0.625-40 ng/mL 口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
0.078-5 ng/mL ELISA Kit for Human Kynurenine/alpha-aminoadipate aminotransferase, mitochondrial