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1,用特殊的微孔板作为测定板,大鼠ELISA试剂盒用亲和素包被微孔板,然后用生物素标记探针的3端,再通过该生物素和包被在微孔板上的亲和素发生连接,将探针固定在微孔板上,形成一个固相捕获系统.注意:探针5端和待检靶序列5端的一段要互补.
2,在扩增时,引物用抗原(生物素,地的高辛或荧光素酶等)标记,这样扩增产物中就会渗入抗原.
3,PCR扩增产物与微孔板上的探针杂交,从而捕获被测靶序列,由于扩增产物中已经渗入抗原,在微孔中加入HRP标记抗体后,酶标抗体就与靶序列的抗原免疫结合,zui后加入酶底物进行酶促显色,大鼠ELISA试剂盒通过光密度测定实现定量.
    PCR-ELISA比PCR本身在病毒分型,基因多态性分析与克隆鉴定等方面有其*的优势.另外,不应用同位素标记,因而避免了放射性带来的危害,而且整个实验周期仅需6h左右,较Southern blot杂交大为缩短实验时间,操作简便,可用于大量标本的检测.尽管与荧光素染色凝胶电泳相比较,PCR-ELISA检测结果的特异性,灵敏性和准确性有显著的提高,但是ELISA试剂盒基本上是一个开放性的反应系统,特别是在洗涤elisa酶联免疫试剂盒价格反应板时,很容易造成污染,从而引起假阳性.因此,在PCR-ELISA整个实验过程中,必须进行严格的无菌操作.同是,PCR-ELISA对PCR产物和探针的杂交条件(PCR产物的稀释度,杂交温度和时间)要求严格.
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