Anti-ACA11冻融多次（≥3次）会从靶标降解到结果可靠性产生连锁负面影响，具体后果按严重程度排列：

‌靶标大量降解，直接导致假阴性‌：ACA11本身是低丰度膜蛋白，冻融3次后降解率会超过50%，低表达组织中甚至会降解，最终检测不到目标信号，出现假阴性结果。

‌增加非特异性干扰，提升假阳性概率‌：降解产生的蛋白片段会引发非特异性结合，WB会出现多条杂带，免疫荧光会出现全片非特异性染色，容易误判杂信号为阳性结果。

‌实验重复性丧失‌：每次冻融降解程度不稳定，不同次实验的信号强度波动超过30%，两次结果差异极大，无法得到稳定可重复的结论。

‌样本失效‌：冻融次数超过5次后，大部分蛋白会变性聚集，样本出现浑浊沉淀，连内参都无法检出，样本直接报废无法使用。

如果已经冻融多次，不建议继续使用，重新提取分装更节省实验时间。