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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 仅供科研研究实验 | 英文名称 | Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 33 ( |
| 物种 | Homo sapiens (Human，人) | 规格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
详细介绍
公司产品仅供科研实验产品属性：
产品名称：解整合素金属蛋白酶33(ADAM33)重组蛋白
物种：Homo sapiens (Human，人)
英文名称：Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 33 (ADAM33)
C20orf153; Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 33
酶与激酶
物种：Homo sapiens (Human，人) 来源：原核表达 宿主E.coli 内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定) 亚细胞定位：：细胞膜 预测分子量：35.3kDa 实际分子量：32kDa(差异分析请参阅说明书) 片段与标签：Lys210~Asp503 with N-terminal His Tag 缓冲液成份：PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性状：冻干粉 纯度：> 80% 等电点：5.9 应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 规格10μg50μg200μg1mg5mg |
特点：
标记：标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，将与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。
酶标记：酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成，其应用范围非常广泛，结果即时可见、敏感性高。
荧光标记：荧光基团AbFluorTM是新型的荧光标记物之一，产品覆盖350-770nm。不同的AbFluor基团经恰当的激光可发光， 从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况，主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色，是一种非常好的亚细胞水平定位的方法。
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标签选择：
亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。
不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：
真核表达系统的重组蛋白表达步骤：
a. 选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）
b. 表达载体的构建
c. 无内毒素的质粒抽提
d. 细胞瞬时转染
e. 表达小试，条件优化
f. 表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）
g. 大量表达
h. 亲和纯化
i. 检测和鉴定
原核表达系统的重组蛋白表达步骤：
a. 选择表达载体
b. 密码子优化
c. 基因合成/亚克隆
d. 转化表达菌株
e. 蛋白表达小试分析
f. 如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化
g. 如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。
h. 鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定
GZMH蛋白；表达蛋白的分析、纯化、检测
诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。
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应用类型: Other英文名称: Survivin英文别名: API4; API-4; API 4; Survivin variant 3 alpha; Apoptosis Inhibitor 4; Apoptosis inhibitor survivin; Apoptosis inhibitor4; Baculoviral IAP repeat containing 5; Baculoviral IAP repeat containing protein 5; Baculoviral IAP repeat-containing protein 5; BIRC 5; BIRC5; BIRC-5; EPR 1; EPR-1; IAP4; IAP-4; IAP 4; SVV; TIAP; BIRC5_MOUSE.
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操作步骤 ：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
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