犬探针法荧光定量PCR试剂盒

实验过程：
一、犬探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
     10×PCR buffer             5μl
     dNTP mixl                 4μl
     引物1（10pM）               2μl
     引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
    加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：犬探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Brucella canis
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。


产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H5N1亚型 染料法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株分析检测革兰氏阴性细菌，化能异养，呼吸和发酵代谢。抗生素测定指示菌

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H5N1亚型 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，菌体细杆状；好氧，呼吸代谢为主。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H5亚型RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H5亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，好氧，呼吸代谢，菌体形状发生杆-球循环变化。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H5亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，化能异养，产乙酸（醋酸）。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6N1亚型RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，菌体杆状，发酵代谢葡萄糖主要产生乳酸。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6N1亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6N1亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6亚型RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢；严格好氧。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H6亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒模式菌株分类革兰氏阳性细菌，菌体球状，链状排列，发酵葡萄糖产生乳酸。模式菌株

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H7N2亚型RT-PCR试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，菌体球状，链状排列，发酵葡萄糖产生乳酸。

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H7N2亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒模式菌株分类革兰氏阳性细菌，菌体球状，链状排列，发酵葡萄糖产生乳酸。模式菌株

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H7N2亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒模式菌株分类；分析检测革兰氏阳性细菌，菌体球状，链状排列，发酵葡萄糖产生乳酸。Type strain; Quality control strain

Influenza Virus A甲型流感（禽感）病毒H7N3亚型RT-PCR试剂盒非模式菌株分析检测革兰氏阳性细菌，菌体球状，链状排列，发酵葡萄糖产生乳酸。Quality control strain for API 20
犬探针法荧光定量PCR试剂盒神经源性分化蛋白6　NDF6 Polyclonal Antibody

神经源性分化蛋白4　NDF4 Polyclonal Antibody

神经源蛋白2　NGN2 Polyclonal Antibody

神经源蛋白1　NGN1 Polyclonal Antibody

神经元正五聚蛋白受体　NPTXR Polyclonal Antibody

神经元正五聚蛋白2　NPTX2 Polyclonal Antibody

神经元正五聚蛋白1　NPTX1 Polyclonal Antibody

神经元引导蛋白3　NAV3 Polyclonal Antibody

神经元乙酰胆*受体亚基B4　ACHB4 Polyclonal Antibody
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂*兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。