绵羊疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

实验过程：
一、绵羊疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：绵羊疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Ovine Herpesvirus(OHV)
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

​
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
Geniposide异质性胞核核糖核蛋白D检测试剂盒20mg

普拉克索碱 质量规格：>98.5% Pramipexole Base

Phytic acid1,6-脱水吡喃葡萄糖标准品规格：规格：人氨肽酶O(AP-O)ELISA试剂盒 0.2ml

人白介素12（IL12）(P70) RED/CSA2  软骨肉瘤相关蛋白2抗体规格:96T/48TApraclonidine Hydrochloride规格:10mgMxA蛋白检测试盒20mg人淋瘤细胞，Raji细胞1x10^6cells

Paclitaxel异质性胞核核糖核蛋白E检测试剂盒20mg

 糖肉汤培养基/Lactose Broth Medium用于食品中沙门氏菌检验前增菌；大肠菌群的增菌培养250克国产/进口

gentiopicrin阿尼利定标准品规格：规格：人AP-1复合体亚基mu-1(AP-1 complex subunit mu-1)ELISA试剂盒 0.2ml

人白介素12（IL12）(P40)ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4  血管生成素3/血管生成素4抗体规格:96T/48TAprepitant规格:125mgNADH细胞色素b5还原酶检测试盒20mg人淋母细胞，T2 (174xcem.T2 )细胞1x10^6cells

98%5g5g果胶酶Y23mumps virus antibody

 Toll样受体9(TLR9)重组蛋白英文名称：Recombinant Toll Like Receptor 9 (TLR9)

ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(723)  促上腺皮质激素（723）(抗原）进口、分装α2干扰素检测试盒500gHuman/人Elisa试盒494199

97%50mg5ml果胶酶Y23Mhyopneumoniae

标准溶液(10μg/ml,u=6%) 质量规格：10μg/ml,u=6% Tsumacide solution

Actin Alpha /AlphaSMA (Actin alpha , smooth muscle aorta)  肌动蛋白(抗原）进口、原装5羟色胺3检测试盒100gHuman/人Elisa试盒494227337

98%10mg5g果胶酶Poliovirus IgA antiobody

 亚盐-多粘菌素-磺嘧啶琼脂基础(SPS) 规格： 250g 用途： 用于食品和矿泉水中产气荚膜梭菌的分离培养和计数(GB/T 8538-2008，GB/T4789.28-2003中4.69，GB/...

AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1)  脂肪细胞增强结合蛋白1现货供应5羟色胺4检测试盒25gHuman/人Elisa试盒4942476
绵羊疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒芥子碱盐 CAS号： 7431778 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

α三联吩 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

香荆芥 CAS号： 499752 规格： HPLC≥98%;50mg 订购|咨询

正壬 CAS号： 112129 规格： HPLC≥95%;0.1ml 订购|咨询

对氧肉桂 CAS号： 1929302 规格： HPLC≥95%;20mg 订购|咨询

大蒜素 CAS号： 539866 规格： UV≥98%;20mg 订购|咨询

紫萁 CAS号：  规格： HPLC≥95%;20mg 订购|咨询

浆苦味素L CAS号： 113146740 规格： HPLC≥95%;20mg 订购|咨询

相思子碱 CAS号： 21339559 规格： HPLC≥95%;20mg 订购|咨询

王不留行黄苷 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

阿多尼弗林碱 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

旱莲苷A CAS号：  规格： HPLC≥95%;20mg 订购|咨询

紫苏 CAS号： 539526 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

苦素 CAS号： 125675094 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

西瑞香素 CAS号： 2034697 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。