麻风分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

【产品名称】麻风分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Mycobacterium leprae
【产品编号】YSP6955
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测，所用仪器为实时荧光PCR仪，可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针，通过实时荧光一步法RT-PCR（Taqman探针法）对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板，扩增β-actin基因，与同类产品相比，UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强，扩增效率更高。
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PCR实验方法步骤：
麻风分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验步骤：
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
rosin脂素A4检测试剂盒20mg

厄贝沙坦 质量规格：>99%,BR,Angiotensin II受体抑制剂 Irbesartan 血红素氧合酶2(HO2)重组蛋白英文名称：Recombinant Heme Oxygenase 2, Decycling (HO2)

性别决定区Y框蛋白2(SOX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 BRCA2 / BCCIP 蛋白 (His & GST 标签)*100(g)

LMP7/PSMB99Human low molecularweight protein/proteasome betatype subunit) ELISA Kit  人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9CAS号：112188166 软脂检测试盒250gHuman/人Elisa试盒30433911

rosavin酰甘油激酶ζ检测试剂盒20mg

知母皂苷元；菝葜皂苷元; 菝葜皂甙元  英文名称：Sarsasapogenin; sarsasapogenine; sarsasapogenin   保存：-20℃   规格：HPLC≥98% 20mg/支 肿瘤坏死因子α诱导蛋白1抗体

性别决定区Y框蛋白3(SOX3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 BOLA1 蛋白 (His 标签)*250(g)

Alpha2MG(Human Alpha2 macroglobulin) ELISA Kit  人α2巨球蛋白CAS号：1120258 油检测试盒1gHuman/人Elisa试盒30433911

5(6)羧基荧光素琥珀酰亚（混合物）5mg

碱 订购|咨询 规格： 20mg 白介素1受体2抗体 SHISA5 ELISA Kit Shisa同源物5(SHISA5)ELISA试剂盒

Goat AntiGuinea IgG Whole serum  羊抗豚鼠IgG抗血清*化腺苷活化蛋白激酶检测试盒25gHuman/人Elisa试盒479500351

5(6)羧基荧光素琥珀酰亚（混合物）5mg

骨化二醇;Calcifediol 规格： 20mg 订购|咨询 Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒规格：100次以上

Goat Antirabbit IgG Whole serum  羊抗兔IgG抗血清进口、分装二单酰辅酶A检测试盒5gHuman/人Elisa试盒479633631

异乌药内6羧基荧光素（单一化合物）20mg

吡格列;Pioglitazone 订购|咨询 规格： 20mg 异柠檬脱氢酶3 beta亚基抗体 RBM24 ELISA Kit RNA结合基元蛋白24(RBM24)ELISA试剂盒

250趋化子20检测试盒5mg骨特异性碱性酶检测试盒ImmunoglobulinA
麻风分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒古伦宾;Columbin CAS号： 546974 规格： 20mg 订购|咨询

告达亭苷元;caudatin CAS号： 38395027 规格： 20mg 订购|咨询

果糖;betaDFructopyra CAS号： 7660255，57487 规格： 20mg 订购|咨询

甘草二铵;Diammonium gly CAS号： 79165063 规格： 20mg 订购|咨询

甘露;Mannitol CAS号： 87785 规格： 100mg 订购|咨询

甘氨;Glycine CAS号： 56406 规格： 100mg 订购|咨询

L谷氨;LGlutamic aci CAS号： 56860 规格： 100mg 订购|咨询

格列风内;Griffonilide CAS号： 61371559 规格： 20mg 订购|咨询

广防风苷A;Epimeredinosid CAS号：  规格： 20mg 订购|咨询

根皮素;Phloretin CAS号： 60822 规格： 20mg 订购|咨询

格列;Gliquidone CAS号： 33342051 规格： 20mg 订购|咨询

格列齐特;Gliclazide CAS号： 21187984 规格： 20mg 订购|咨询

枸橘苷;Poncirin CAS号： 14941083 规格： 20mg 订购|咨询

高香草;Homovanillic ac CAS号： 306081 规格： 20mg 订购|咨询

钩藤碱; Rhynchophylline CAS号： 76664 规格： 20mg 订购|咨询