休斯新孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

实验过程：
一、休斯新孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：休斯新孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Neospora hughsi
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

​
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
Synephrine有丝分裂原活化蛋白激酶14检测试剂盒20mg

D-果糖;D(-)-Fructose 订购|咨询 规格： 100mg ELISA Kit for Human Serine/arginine-rich splicing factor 1大鼠线粒体解偶联蛋白2(UCP2)ELISA试剂盒，英文名：UCP2 ELISA Kit

胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 COL9A1 蛋白 (His 标签)*100(g)

HSP90(Human Heat Shock Protein 90) ELISA Kit  人热休克蛋白90CAS号：050540 查尔合成酶检测试盒100gHuman/人Elisa试盒3069407

Arbutin诱导型一化氮合成酶检测试剂盒20mg

壬(Standard for GC ,>99%(GC)) 质量规格：Standard for GC ,>99%(GC)  Nonoic acid 胰高血糖素(GC)重组蛋白英文名称：Recombinant Glucagon (GC)

Ⅰ型胶原α2(COL1α2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 CHST11 / C4ST-1 蛋白 (His 标签)*100(g)

HSP70(Human Heat Shock Protein 70) ELISA Kit  人热休克蛋白70CAS号：107959钙依赖蛋白激酶检测试盒25gHuman/人Elisa试盒3069429

98%25g25g胆酶(ChE)检测试剂盒(羟三化铁微板法)epidermalgrowthfactor receptor varianttypeⅢ

硝地平 质量规格：>99%,CP,AR Nifedipine 人外周血嗜碱性白血病细胞英文名称：KU812

Dehydrocholic acidBR，98.5%Bcl2；腺病E1B相互作用蛋白3检测试盒20mgI型胶原检测试盒PINT

98%1g1gα淀粉酶(αAMS)检测试剂盒(硝基水杨法)Cyclin Dependent Kinase 11

醋地孕（标准品） 质量规格：>98%,标准品 Chlormadinone Acetate 卵巢肿瘤蛋白1(OTUB1)重组蛋白英文名称：Recombinant Otubain 1 (OTUB1)

全式钴氨素检测试盒20mgI型前胶原氨基端肽检测试盒PICP

98%5g500mg淀粉酶(AMS)检测试剂盒(淀粉比色法)Cyclin Dependent Kinase 5

大戟二醇 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 ELISA Kit for Human Hematopoietic prostaglandin D synthase小鼠骨骼肌慢肌肌钙蛋白T(TNNT1)ELISA试剂盒，英文名：TNNT1 ELISA Kit

泛钴胺素检测试盒20mgI型前胶原羧基端肽检测试盒Klotho
休斯新孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒D半乳糖醛 CAS号： 91510622 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

7木糖紫杉 CAS号： 90332664 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

7木糖苷10脱酰紫杉 CAS号： 90332631 规格： HPLC≥40%;20mg 订购|咨询

(+)松萝 CAS号： 34769443 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

()薄荷 CAS号： 10458147 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

左旋箭毒碱 CAS号： 436055 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

紫堇块茎碱 CAS号： 517566 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

紫菫定 CAS号： 476697 规格： HPLC≥95%;10mg 订购|咨询

正十二巨大戟 CAS号： 54706706 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

泽兰黄 CAS号： 520116 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

紫罗兰 CAS号： 8013909 规格： HPLC≥98%;0.1ml 订购|咨询

支脱皂苷元 CAS号： 511966 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

左旋千金藤啶碱 CAS号： 16562133 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

紫苏 CAS号： 536594 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

竹红菌素 CAS号： 123940545 规格： HPLC≥97%;20mg 订购|咨询
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。